| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| 1.1 禽源呼肠孤病毒概况 | 第14-16页 |
| 1.1.1 鸡呼肠孤病毒 | 第14-15页 |
| 1.1.2 番鸭呼肠孤病毒 | 第15页 |
| 1.1.3 鸭呼肠孤病毒 | 第15-16页 |
| 1.2 禽呼肠孤病毒S1基因节段基因结构特征 | 第16-18页 |
| 1.3 禽呼肠孤病毒S1基因节段编码蛋白 | 第18-21页 |
| 1.3.1 P10蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 1.3.2 P17蛋白的功能 | 第20页 |
| 1.3.3 σC蛋白的功能 | 第20-21页 |
| 1.4 呼肠孤病毒反向遗传操作系统的发展 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的目的以及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 水禽呼肠孤病毒P18蛋白功能初步研究 | 第23-32页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 病毒、载体、细胞和动物 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 研究方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 P18基因的扩增（EcoR I、Kpn I两个酶切位点） | 第24-25页 |
| 2.2.2 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第25页 |
| 2.2.3 pCold-TF-S1-P18蛋白的诱导表达及纯化 | 第25页 |
| 2.2.4 抗pCold-TF-S1-P18多抗的制备 | 第25页 |
| 2.2.5 多克隆抗体的特异性检测 | 第25页 |
| 2.2.6 P18蛋白表达时相分析 | 第25-26页 |
| 2.2.7 IHC检测P18蛋白在组织中分布 | 第26页 |
| 2.3 结果 | 第26-30页 |
| 2.3.1 pCold-TF-S1-P18蛋白的诱导表达及纯化 | 第26-28页 |
| 2.3.2 重组pCold-TF-P18蛋白多克隆抗体的Western-blot检测 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组pCold-TF-P18蛋白表达时相分析 | 第29-30页 |
| 2.3.4 IHC检测组织中病毒分布情况 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 水禽呼肠孤病毒反向遗传操作系统的建立及鉴定 | 第32-53页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 病毒、载体、质粒和细胞 | 第32页 |
| 3.1.2 实验动物和SPF鸡胚 | 第32页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.4 主要溶液及试剂的配制 | 第33页 |
| 3.2 研究方法 | 第33-42页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| 3.2.2 病毒RNA的提取 | 第34页 |
| 3.2.3 10 个全长基因节段的c DNA的合成 | 第34-35页 |
| 3.2.4 10 个全长基因节段的扩增与克隆 | 第35-36页 |
| 3.2.5 体外转录载体的设计与改造 | 第36页 |
| 3.2.6 分子标签引入 | 第36-37页 |
| 3.2.7 病毒10个基因节段的扩增与克隆 | 第37页 |
| 3.2.8 SDS碱裂解法大量提取10个质粒 | 第37-38页 |
| 3.2.9 病毒的拯救 | 第38页 |
| 3.2.10 拯救病毒的RT-PCR和分子标签的鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.11 拯救病毒的细胞攻毒试验 | 第39页 |
| 3.2.12 拯救病毒的Western-blot检测 | 第39页 |
| 3.2.13 拯救病毒的间接免疫荧光检测 | 第39-40页 |
| 3.2.14 拯救病毒的蚀斑试验 | 第40页 |
| 3.2.15 拯救病毒的一步生长曲线绘制 | 第40页 |
| 3.2.16 鸭致病性试验 | 第40-41页 |
| 3.2.17 病理组织切片观察 | 第41页 |
| 3.2.18 免疫组织化学检测 | 第41-42页 |
| 3.3 结果 | 第42-51页 |
| 3.3.1 拯救病毒的RT-PCR检测 | 第42页 |
| 3.3.2 拯救病毒分子标签的引入 | 第42-43页 |
| 3.3.3 拯救病毒的细胞病变 | 第43-44页 |
| 3.3.4 拯救病毒的Western-blot检测 | 第44页 |
| 3.3.5 拯救病毒的IFA检测 | 第44页 |
| 3.3.6 拯救病毒的蚀斑检测 | 第44-46页 |
| 3.3.7 拯救病毒的生长曲线测定 | 第46-47页 |
| 3.3.8 拯救病毒的鸡胚致死试验 | 第47页 |
| 3.3.9 拯救病毒的动物回归试验 | 第47-48页 |
| 3.3.10 拯救病毒的组织病理切片和免疫组化观察 | 第48-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 3.4.1 T7 RNA聚合酶介导的呼肠孤病毒的拯救系统 | 第51-52页 |
| 3.4.2 分子标签的引入和载体的构建 | 第52页 |
| 3.4.3 病毒的拯救效率 | 第52-53页 |
| 第四章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |
