| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 鸡毒支原体概述 | 第12页 |
| 1.2 鸡毒支原体的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 鸡毒支原体流行病学 | 第12页 |
| 1.2.2 鸡毒支原体病的症状 | 第12-13页 |
| 1.2.3 鸡毒支原体的诊断 | 第13页 |
| 1.3 鸡毒支原体的致病机理 | 第13-17页 |
| 1.3.1 直接致病作用 | 第14页 |
| 1.3.2 免疫损伤机制 | 第14-17页 |
| 1.4 鸡毒支原体的防治 | 第17页 |
| 1.4.1 消灭种卵内鸡毒支原体 | 第17页 |
| 1.4.2 疫苗中鸡毒支原体的检测 | 第17页 |
| 1.4.3 疫苗免疫接种 | 第17页 |
| 1.5 鸡毒支原体Gro EL的结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.5.1 热休克蛋白的概述 | 第17页 |
| 1.5.2 Gro EL的结构 | 第17-18页 |
| 1.5.3 Gro EL的作用机制 | 第18页 |
| 1.6 蛋白互作的研究方法 | 第18-20页 |
| 1.6.1 分子生物学方法 | 第18-19页 |
| 1.6.2 分子物理学方法 | 第19-20页 |
| 1.6.3 生物信息学研究方法 | 第20页 |
| 1.7 目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-29页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 细胞、菌株及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要设备 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.3 目的基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.4 重组质粒构建与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.5 鸡毒支原体培养方法及LAMPs提取 | 第25页 |
| 2.2.6 IL-1β释放量的检测 | 第25-26页 |
| 2.2.7 IL-1β的最佳诱导时间和最佳诱导剂量的确定 | 第26页 |
| 2.2.8 激光共聚焦显微镜检测p65转核 | 第26-27页 |
| 2.2.9 Western blot检测p65磷酸化 | 第27页 |
| 2.2.10 TLR2在LAMPs刺激DF-1 细胞IL-1β释放水平的作用 | 第27页 |
| 2.2.11 My D88在LAMPs刺激DF-1 细胞IL-1β释放水平的作用 | 第27页 |
| 2.2.12 重组蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.13 GST-Gro EL的黏附特性 | 第28页 |
| 2.2.14 GST pulldown | 第28页 |
| 2.2.15 免疫共沉淀 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-38页 |
| 3.1 目的基因的扩增 | 第29页 |
| 3.2 重组质粒构建 | 第29-30页 |
| 3.3 LAMPs诱导DF-1 细胞IL-1β表达的最佳剂量 | 第30页 |
| 3.4 LAMPs诱导DF-1 细胞IL-1β释放的最佳时间 | 第30-31页 |
| 3.5 亚细胞定位LAMPs诱导DF-1 细胞p65转核 | 第31-32页 |
| 3.6 Western Blot检测LAMPs诱导DF-1 细胞p65磷酸化 | 第32页 |
| 3.7 TLR2对LAMPs刺激的DF-1 细胞IL-1β 表达水平的影响 | 第32-33页 |
| 3.8 My D88对LAMPs刺激的DF-1 细胞IL-1β表达水平的影响 | 第33页 |
| 3.9 GST-Gro EL蛋白的表达及纯化 | 第33-34页 |
| 3.10 GST-Gro EL蛋白的黏附特性 | 第34-35页 |
| 3.11 GST-Gro EL诱导DF-1 细胞IL-1β表达 | 第35页 |
| 3.12 Western Blot证明GST-Gro EL能够诱导DF-1 细胞p65磷酸化 | 第35-36页 |
| 3.13 GST pulldown钓取DF-1 细胞蛋白 | 第36页 |
| 3.14 免疫共沉淀验证Gro EL蛋白与Annexin2相互作用 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 附录 | 第49-50页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第50页 |
