摘要 | 第6-8页 |
abstract | 第8-9页 |
文献综述 | 第13-38页 |
第一章 病原感染过程中炎性小体的活化和IL-1β 释放研究进展 | 第13-28页 |
1.1 炎性小体及其功能 | 第14-16页 |
1.2 抗病毒免疫反应中的IL-1β 和IL-18 | 第16-17页 |
1.3 病毒感染中炎性小体的激活 | 第17-22页 |
1.3.1 NLRP3 炎性小体 | 第18-20页 |
1.3.2 AIM2 炎性小体 | 第20-21页 |
1.3.3 IFI16 炎性小体 | 第21-22页 |
1.3.4 RIG-I炎性小体 | 第22页 |
1.4 炎性小体激活病毒性逃避和效应功能 | 第22-23页 |
1.5 抑制炎性小体组装 | 第23-25页 |
1.5.1 抑制caspase-1 功能 | 第24-25页 |
1.5.2 IL-1β 和IL-18 的中和作用 | 第25页 |
1.6 Viroporin激活炎性小体 | 第25-27页 |
1.7 展望 | 第27-28页 |
第二章 脂筏和胆固醇在病毒感染中的作用研究进展 | 第28-38页 |
2.1 脂筏的功能及脂筏途径 | 第28-30页 |
2.1.1 发动蛋白依赖的脂筏途径 | 第28-29页 |
2.1.2 非发动蛋白依赖的脂筏途径 | 第29-30页 |
2.2 脂筏在病毒感染中的作用 | 第30-31页 |
2.3 脂筏作为病毒进入的平台 | 第31-35页 |
2.3.1 非囊膜病毒 | 第32-33页 |
2.3.2 囊膜病毒 | 第33-35页 |
2.4 脂筏在病毒复制、装配和释放中的作用 | 第35-37页 |
2.4.1 非囊膜病毒 | 第35页 |
2.4.2 囊膜病毒 | 第35-37页 |
2.5 展望 | 第37-38页 |
试验研究 | 第38-78页 |
第三章 猪瘟病毒感染对IL-1β 释放的影响 | 第38-47页 |
3.1 材料 | 第38-39页 |
3.1.1 病毒,细胞与主要试剂 | 第38-39页 |
3.1.2 主要溶液的配制 | 第39页 |
3.1.3 主要仪器设备 | 第39页 |
3.2 方法 | 第39-40页 |
3.2.1 实时荧光定量PCR | 第39-40页 |
3.2.2 Western blot | 第40页 |
3.2.3 猪瘟病毒感染诱导IL-1β 释放的检测 | 第40页 |
3.2.4 ROS是否参与猪瘟病毒感染诱导IL-1β 释放的检测 | 第40页 |
3.2.5 猪瘟病毒感染激活caspase-1 的检测 | 第40页 |
3.3 结果 | 第40-45页 |
3.3.1 猪瘟病毒感染诱导IL-1β 释放 | 第40-42页 |
3.3.2 猪瘟病毒感染诱导IL-1β 释放需要病毒的复制 | 第42页 |
3.3.3 CSFV感染能够上调ROS水平 | 第42-43页 |
3.3.4 ROS不参与CSFV诱导的IL-1β 释放 | 第43-44页 |
3.3.5 CSFV感染激活caspase-1 | 第44-45页 |
3.4 讨论 | 第45-46页 |
3.5 小结 | 第46-47页 |
第四章 猪瘟病毒p7 蛋白诱导IL-1β 释放的研究 | 第47-59页 |
4.1 材料 | 第47页 |
4.2 方法 | 第47-49页 |
4.2.1 克隆CSFV p7 基因序列及分析 | 第47-48页 |
4.2.2 真核表达载体pEGFP-p7 的构建 | 第48页 |
4.2.3 pEGFP-p7 质粒的转染及稳转细胞系的建立 | 第48页 |
4.2.4 稳转细胞株的鉴定 | 第48-49页 |
4.2.5 CSFV p7 蛋白诱导IL-1β 释放的检测 | 第49页 |
4.2.6 CSFV p7 蛋白降解特性的研究 | 第49页 |
4.2.7 MG132 和amantadine对CSFV p7 诱导的IL-1β 释放的影响 | 第49页 |
4.3 结果 | 第49-57页 |
4.3.1 扩增CSFV p7 基因及序列分析 | 第49-51页 |
4.3.2 真核表达载体pEGFP-p7 的构建 | 第51页 |
4.3.3 稳定表答CSFV p7 蛋白的细胞株的建立及鉴定 | 第51页 |
4.3.4 CSFV p7 蛋白诱导IL-1β 释放 | 第51-52页 |
4.3.5 CSFV p7 蛋白是一种不稳定的蛋白 | 第52-55页 |
4.3.6 MG132 和amantadine对CSFV p7 诱导的IL-1β 释放的影响 | 第55-57页 |
4.4 讨论 | 第57-58页 |
4.5 小结 | 第58-59页 |
第五章 胆固醇在猪瘟病毒感染中的作用 | 第59-70页 |
5.1 材料 | 第59页 |
5.2 方法 | 第59-61页 |
5.2.1 MTT法检测甲基-β-环糊精(MβCD)对巨噬细胞毒性 | 第59-60页 |
5.2.2 细胞质膜及病毒囊膜上胆固醇的去除与补充 | 第60页 |
5.2.3 去除细胞质膜上的胆固醇对CSFV入侵的影响 | 第60页 |
5.2.4 不同浓度MβCD处理对CSFV入侵的影响 | 第60页 |
5.2.5 细胞质膜上的胆固醇耗竭对CSFV入侵细胞后的影响 | 第60-61页 |
5.2.6 病毒囊膜上胆固醇的耗竭对CSFV入侵细胞的影响 | 第61页 |
5.3 结果 | 第61-68页 |
5.3.1 MβCD细胞毒性的测定 | 第61-62页 |
5.3.2 去除胆固醇影响CSFV的入侵 | 第62-64页 |
5.3.3 胆固醇的耗竭影响CSFV的复制 | 第64-65页 |
5.3.4 添加外源性胆固醇能够部分逆转MβCD处理对CSFV的影响 | 第65-66页 |
5.3.5 病毒囊膜上的胆固醇影响CSFV感染 | 第66-68页 |
5.4 讨论 | 第68-69页 |
5.5 小结 | 第69-70页 |
第六章 猪瘟病毒感染对caveolin-1 表达的影响 | 第70-78页 |
6.1 材料 | 第70页 |
6.2 方法 | 第70-72页 |
6.2.1 caveolin-1 引物的设计 | 第70页 |
6.2.2 CSFV感染后巨噬细胞 3D4/2 中caveolin-1 表达的检测 | 第70-71页 |
6.2.3 确定嘌呤霉素筛选浓度 | 第71页 |
6.2.4 caveolin-1 干扰细胞的筛选 | 第71页 |
6.2.5 caveolin-1 干扰细胞干扰效果的检测 | 第71页 |
6.2.6 干扰caveolin-1 后对CSFV感染的影响 | 第71-72页 |
6.3 结果 | 第72-76页 |
6.3.1 CSFV上调caveolin-1 的表达 | 第72-73页 |
6.3.2 caveolin-1 干扰细胞的筛选 | 第73-74页 |
6.3.3 caveolin-1 干扰细胞株的鉴定 | 第74-75页 |
6.3.4 干扰caveolin-1 后对CSFV感染的影响 | 第75-76页 |
6.4 讨论 | 第76-77页 |
6.5 小结 | 第77-78页 |
结论 | 第78页 |
本论文的创新点 | 第78页 |
有待于进一步研究的问题 | 第78-79页 |
参考文献 | 第79-94页 |
主要缩略词和中英文对照表(Abbreviation Index) | 第94-95页 |
致谢 | 第95-96页 |
作者简介 | 第96页 |