| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 Aptamer的研究状况 | 第14-19页 |
| 1.1.1 SELEX技术原理及筛选步骤 | 第14-15页 |
| 1.1.2 核酸适体筛选中的分离方法 | 第15-17页 |
| 1.1.3 核酸适体的应用 | 第17-19页 |
| 1.2 氯霉素残留的危害及检测方法 | 第19-21页 |
| 1.2.1 传统的检测方法 | 第19页 |
| 1.2.2 基于核酸适体生物传感器的检测方法 | 第19-21页 |
| 1.3 本课题的研究工作 | 第21-24页 |
| 1.3.1 本课题的研究意义 | 第21页 |
| 1.3.2 本课题的技术路线及研究内容 | 第21-24页 |
| 第二章 氯霉素核酸适体的体外SELEX筛选与鉴定 | 第24-40页 |
| 2.1 实验材料与设备 | 第24-27页 |
| 2.1.1 初级单链寡核苷酸文库与引物 | 第24页 |
| 2.1.2 选用的主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.1.4 配制缓冲液 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 CAP-base与羧基磁珠的偶联 | 第27-28页 |
| 2.2.2 SELEX体外筛选过程 | 第28-30页 |
| 2.2.3 克隆、测序及序列分析 | 第30页 |
| 2.2.4 解离常数(K_d)的测定 | 第30-31页 |
| 2.2.5 特异性分析 | 第31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-38页 |
| 2.3.1 CAP-base与羧基磁珠的偶联 | 第31-33页 |
| 2.3.2 SELEX体外筛选过程 | 第33-34页 |
| 2.3.3 克隆、测序及序列分析 | 第34-36页 |
| 2.3.4 解离常数(K_d)的测定 | 第36-37页 |
| 2.3.5 特异性实验 | 第37-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 基于实时荧光PCR的核酸适体生物传感器的建立 | 第40-54页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第40-42页 |
| 3.1.1 Aptamer、引物、固定探针的设计与合成 | 第40页 |
| 3.1.2 试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第41页 |
| 3.1.4 主要缓冲液的配制 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 建立氯霉素核酸适体生物传感器体系 | 第42-43页 |
| 3.2.2 确定固定探针的长度 | 第43页 |
| 3.2.3 Aptamer浓度的优化 | 第43页 |
| 3.2.4 确定BufferA中NaCl的浓度 | 第43-44页 |
| 3.2.5 共育时间的确定 | 第44页 |
| 3.2.6 制定检测方法的标准曲线 | 第44页 |
| 3.2.7 确定最低检测限 | 第44页 |
| 3.2.8 特异性实验 | 第44页 |
| 3.2.9 牛奶中氯霉素的检測 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-52页 |
| 3.3.1 基于荧光定量PCR建立的氯霉素核酸适体体系的原理 | 第45-46页 |
| 3.3.2 确定固定探针的长度 | 第46-47页 |
| 3.3.3 Aptamer浓度的优化 | 第47-48页 |
| 3.3.4 确定Buffer A中NaCl的浓度 | 第48页 |
| 3.3.5 共育时间的确定 | 第48-49页 |
| 3.3.6 制定检测方法的标准曲线 | 第49-51页 |
| 3.3.7 确定最低检测限 | 第51页 |
| 3.3.8 特异性分析 | 第51-52页 |
| 3.3.9 牛奶中氯霉素的检测 | 第52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 总结与展望 | 第54-56页 |
| 4.1 总结 | 第54-56页 |
| 4.2 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 研究成果和发表的学术论文 | 第67-68页 |
| 作者和导师简介 | 第68-71页 |
| 附件 | 第71-72页 |
