| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 手性药物及手性拆分 | 第16-18页 |
| 1.1.1 手性药物研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.2 手性药物的制备方法 | 第17页 |
| 1.1.3 全细胞手性拆分 | 第17-18页 |
| 1.1.4 酶的手性拆分 | 第18页 |
| 1.2 丙肝NS3酶抑制剂类药物手性中间体 | 第18-24页 |
| 1.2.1 肝炎分类及特点 | 第18-19页 |
| 1.2.2 病毒性肝炎及特点 | 第19页 |
| 1.2.3 丙肝病毒的特点及治疗方法 | 第19-20页 |
| 1.2.4 丙型肝炎蛋白酶及其抑制剂 | 第20-21页 |
| 1.2.5 NS3-4A抑制剂的研发进展 | 第21-22页 |
| 1.2.6 乙烯基环丙烷氨基酸及其制备方法 | 第22-24页 |
| 1.3 含脂肪酶(酯酶)微生物菌种的筛选及鉴定 | 第24-25页 |
| 1.3.1 含脂肪酶(酯酶)微生物菌种的筛选 | 第24-25页 |
| 1.3.2 含脂肪酶(酯酶)微生物菌种的鉴定 | 第25页 |
| 1.4 课题的研究目的和意义 | 第25-28页 |
| 第二章 丙型肝炎NS3酶抑制剂类药物中间体的合成及检测条件的确定 | 第28-38页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验仪器及材料 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.3.1 丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体A的合成 | 第29-31页 |
| 2.3.2 丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体C的合成 | 第31页 |
| 2.3.3 丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体D的合成 | 第31-32页 |
| 2.3.4 丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体及其衍生物对映异构体检测条件的确定 | 第32页 |
| 2.4 实验结果与结论 | 第32-37页 |
| 2.4.1 丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体A的合成 | 第32-33页 |
| 2.4.2 丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体C的合成 | 第33页 |
| 2.4.3 丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体D的合成 | 第33-34页 |
| 2.4.4 丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体及衍生物检测条件的确定 | 第34-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 选择性拆分丙型肝炎NS3酶抑制剂药物中间体的微生物及酶的筛选 | 第38-48页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验仪器及材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 培养基 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 已有资源的初步筛选 | 第39-40页 |
| 3.3.2 土壤中选择性拆分丙型肝炎NS3酶抑制剂类药物中间体菌株的筛选 | 第40-42页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第42-46页 |
| 3.4.1 已有资源的初步筛选 | 第42-43页 |
| 3.4.2 土壤样品中菌株筛选结果 | 第43页 |
| 3.4.3 菌株拆分实验结果的检测 | 第43-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 第四章 菌株鉴定 | 第48-54页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 实验仪器及材料 | 第48-49页 |
| 4.2.1 培养基 | 第48页 |
| 4.2.2 溶液及缓冲液的配制 | 第48-49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.3.1 菌株16S rRNA序列的克隆 | 第49-50页 |
| 4.3.2 重组质粒的构建 | 第50-51页 |
| 4.3.3 测序 | 第51-52页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第52-53页 |
| 4.4.1 菌株16S rRNA序列的克隆 | 第52页 |
| 4.4.2 重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| 4.4.3 测序 | 第53页 |
| 4.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 高效菌株全细胞拆分底物反应条件的优化 | 第54-70页 |
| 5.1 引言 | 第54页 |
| 5.2 实验仪器及材料 | 第54页 |
| 5.2.1 培养基 | 第54页 |
| 5.2.2 溶液及缓冲液的配制 | 第54页 |
| 5.3 实验方法 | 第54-58页 |
| 5.3.1 反应时间对拆分底物的影响 | 第54-55页 |
| 5.3.2 温度对拆分底物的影响 | 第55页 |
| 5.3.3 pH对拆分底物的影响 | 第55页 |
| 5.3.4 湿菌体重量对拆分底物的影响 | 第55-56页 |
| 5.3.5 金属离子对拆分底物的影响 | 第56页 |
| 5.3.6 两相反应对拆分底物的影响 | 第56页 |
| 5.3.7 在最适条件下的底物拆分结果 | 第56页 |
| 5.3.8 CY-2菌株拆分底物谱的研究 | 第56-58页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第58-69页 |
| 5.4.1 反应时间对拆分底物的影响 | 第58页 |
| 5.4.2 温度对拆分底物的影响 | 第58-59页 |
| 5.4.3 pH对拆分底物的影响 | 第59-60页 |
| 5.4.4 湿菌体重量对拆分底物的影响 | 第60-61页 |
| 5.4.5 金属离子对拆分底物的影响 | 第61-62页 |
| 5.4.6 两相反应对拆分底物的影响 | 第62-63页 |
| 5.4.7 在最适条件下的底物拆分结果 | 第63-64页 |
| 5.4.8 CY-2菌株拆分底物谱的研究 | 第64-69页 |
| 5.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 第六章 基因挖掘法构建基因工程菌及其蛋白的表达 | 第70-92页 |
| 6.1 引言 | 第70-72页 |
| 6.2 实验仪器及材料 | 第72-73页 |
| 6.2.1 培养基 | 第72页 |
| 6.2.2 溶液及缓冲液的配制 | 第72-73页 |
| 6.3 实验方法 | 第73-79页 |
| 6.3.1 SQR-21菌的复苏和基因组的提取 | 第73页 |
| 6.3.2 SQR-21中水解酶质粒的构建 | 第73-78页 |
| 6.3.3 SQR-21水解酶的诱导表达 | 第78页 |
| 6.3.4 SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第78-79页 |
| 6.3.5 粗酶的拆分活性检测 | 第79页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第79-91页 |
| 6.4.1 SQR-21菌的复苏和基因组的提取 | 第79页 |
| 6.4.2 SQR-21片段基因的克隆 | 第79-81页 |
| 6.4.3 SQR-21中水解酶重组质粒的构建 | 第81-86页 |
| 6.4.4 SQR-21水解酶的诱导表达 | 第86-89页 |
| 6.4.5 粗酶的拆分活性检测 | 第89-91页 |
| 6.5 本章小结 | 第91-92页 |
| 第七章 总结与展望 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-98页 |
| 附录 | 第98-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第108-110页 |
| 作者与导师简介 | 第110-111页 |
| 附件 | 第111-112页 |
