| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 文献综述 | 第8-16页 |
| 1.1 大肠杆菌表达系统与融合标签 | 第8-9页 |
| 1.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第8页 |
| 1.1.2 融合标签应用和移除 | 第8-9页 |
| 1.2 蛋白酶简介 | 第9-10页 |
| 1.3 酵母SUMO与SUMO蛋白酶ULP研究进展 | 第10-13页 |
| 1.3.1 SUMO的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.3.2 SUMO蛋白酶ULP研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 密码子对重组蛋白表达影响与改善策略 | 第13-16页 |
| 1.4.1 密码子对重组蛋白表达的影响 | 第13-14页 |
| 1.4.2 提高稀有tRNA丰度和密码子优化对重组蛋白表达的影响 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16-17页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第16页 |
| 2.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-27页 |
| 3.1 材料 | 第17-18页 |
| 3.1.1 菌株来源 | 第17页 |
| 3.1.2 质粒与基因来源 | 第17页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第17页 |
| 3.1.4 部分缓冲液的配制 | 第17-18页 |
| 3.2 仪器和设备 | 第18页 |
| 3.3 方法 | 第18-27页 |
| 3.3.1 原核表达载体构建 | 第18-20页 |
| 3.3.1.1 含His6标签的SUMO、ULP野生与合成型原核表达载体构建 | 第18-19页 |
| 3.3.1.2 融合野生与合成型SUMO标签的玉米SR和GLTR原核表达载体的构建 | 第19页 |
| 3.3.1.3 含不同标签的ULP(S)原核表达载体构建 | 第19-20页 |
| 3.3.1.4 融合野生与合成型SUMO标签的底物原核表达载体构建 | 第20页 |
| 3.3.2 重组蛋白表达与定性定量检测 | 第20-24页 |
| 3.3.2.1 含His6标签的SUMO(WT)和SUMO(S)表达与定性定量检测 | 第20-22页 |
| 3.3.2.2 野生与合成型SUMO融合玉米SR和GLTR的表达与蛋白电泳检测 | 第22-23页 |
| 3.3.2.3 含His6标签的ULP(WT)和ULP(S)表达与定性定量检测 | 第23-24页 |
| 3.3.2.4 含不同标签的ULP(S)的表达与蛋白电泳检测 | 第24页 |
| 3.3.3 野生与合成型SUMO、ULP系统的胞内酶切分析 | 第24页 |
| 3.3.4 含不同标签ULP(S)的酶活力分析 | 第24-25页 |
| 3.3.4.1 以SUMO(WT)-EmGFP为底物的酶切活力分析 | 第24-25页 |
| 3.3.4.2 以SUMO(WT)-eDAL为底物的酶切活力分析 | 第25页 |
| 3.3.5 ULP(S)的大量蛋白纯化与产量测定 | 第25-27页 |
| 4 结果与分析 | 第27-36页 |
| 4.1 密码子优化对SUMO蛋白性质和表达量的影响 | 第27-28页 |
| 4.2 密码子优化对SUMO融合蛋白表达水平的影响 | 第28页 |
| 4.3 密码子优化对ULP蛋白酶性质和表达量的影响 | 第28-30页 |
| 4.3.1 密码子优化对ULP蛋白酶可溶性表达的影响 | 第28-29页 |
| 4.3.2 密码子优化对ULP蛋白酶表达量的影响 | 第29-30页 |
| 4.4 野生型与合成型SUMO、ULP系统的胞内酶切结果分析 | 第30-32页 |
| 4.5 融合标签对ULP(S)表达的影响 | 第32页 |
| 4.6 融合标签对ULP(S)酶切活力的影响 | 第32-34页 |
| 4.6.1 以SUMO-EmGFP为底物进行酶切活力分析 | 第32-33页 |
| 4.6.2 以SUMO-eDAL为底物进行酶切活力分析 | 第33-34页 |
| 4.7 ULP(S)蛋白酶的大量纯化 | 第34-36页 |
| 5 讨论 | 第36-38页 |
| 5.1 密码子优化对蛋白表达量的影响 | 第36页 |
| 5.2 密码子优化对蛋白性质与功能的影响 | 第36-37页 |
| 5.3 原核表达载体和融合标签对同义突变体蛋白表达的影响 | 第37-38页 |
| 6 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 个人简介 | 第47页 |
