| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 普鲁兰酶的概述 | 第8页 |
| 1.2 普鲁兰酶的研究进展 | 第8-10页 |
| 1.2.1 普鲁兰酶的主要生产菌株 | 第8-9页 |
| 1.2.2 普鲁兰酶的异源表达研究 | 第9-10页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表达系统概述 | 第10-12页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌表达系统的特点 | 第10-11页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌宿主菌株 | 第11页 |
| 1.3.3 枯草芽孢杆菌表达系统的载体 | 第11-12页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌的启动子概述 | 第12-13页 |
| 1.4.1 组成型启动子 | 第12-13页 |
| 1.4.2 诱导型启动子 | 第13页 |
| 1.5 本研究的意义 | 第13-14页 |
| 1.6 本论文的具体研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 培养基与溶液 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 枯草芽孢杆菌表达系统构建 | 第17-19页 |
| 2.2.2 重组菌株B. subtilis WB800/pMA0911-PHpaII-pul的普鲁兰酶表达 | 第19-20页 |
| 2.2.3 构建含有强启动子P43的重组菌 | 第20页 |
| 2.2.4 宿主菌的优化 | 第20页 |
| 2.2.5 重组菌生长曲线和发酵曲线的测定 | 第20页 |
| 2.2.6 组成型重组菌株的稳定性分析 | 第20-21页 |
| 2.2.7 构建载有蔗糖诱导启动子PsacB的重组菌 | 第21-22页 |
| 2.2.8 普鲁兰酶的蔗糖诱导表达及其诱导条件优化 | 第22-23页 |
| 2.2.9 普鲁兰酶酶活的测定 | 第23页 |
| 2.2.10 普鲁兰酶表达的SDS-PAGE分析 | 第23-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-40页 |
| 3.1 普鲁兰酶枯草芽孢杆菌表达系统的构建及表达 | 第25-28页 |
| 3.1.1 普鲁兰酶基因pul的扩增 | 第25页 |
| 3.1.2 重组菌B. subtilis WB800/pMA0911-PHpaII-pul的构建 | 第25-26页 |
| 3.1.3 普鲁兰酶表达的SDS-PAGE分析 | 第26-27页 |
| 3.1.4 重组菌普鲁兰酶胞内外酶活分析 | 第27-28页 |
| 3.2 枯草芽孢杆菌表达系统启动子和宿主菌的优化 | 第28-32页 |
| 3.2.1 重组菌B. subtilis WB800/pMA0911-P43-pul的构建 | 第28页 |
| 3.2.2 B. subtilis WB800/pMA0911-P43-pul的酶活测定和SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| 3.2.3 以B. subtilis WB600为宿主菌的重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第29页 |
| 3.2.4 不同宿主菌对普鲁兰酶基因表达的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.5 四株优化重组菌产普鲁兰酶的SDS-PAGE分析 | 第30-31页 |
| 3.2.6 优化菌株的生长曲线和发酵过程曲线 | 第31-32页 |
| 3.3 组成型重组菌株的稳定性分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 外源蛋白的表达对重组质粒丢失的影响 | 第33-34页 |
| 3.3.2 重组质粒的结构型稳定性分析 | 第34-35页 |
| 3.4 枯草芽孢杆菌蔗糖诱导型表达系统的构建及其诱导条件的优化 | 第35-40页 |
| 3.4.1 蔗糖诱导型表达系统的构建 | 第35-36页 |
| 3.4.2 普鲁兰酶的蔗糖诱导型分泌表达 | 第36-37页 |
| 3.4.3 蔗糖诱导表达条件的优化 | 第37-39页 |
| 3.4.4 最佳诱导条件下的发酵过程曲线 | 第39-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-41页 |
| 主要结论 | 第40页 |
| 展望 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
