| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·植物中的LEA基因 | 第10页 |
| ·LEA蛋白基因简介 | 第10-14页 |
| ·LEA蛋白的存在和性质 | 第10-11页 |
| ·LEA蛋白的结构 | 第11-12页 |
| ·LEA蛋白与温度胁迫 | 第12-13页 |
| ·LEA蛋白主要功能 | 第13页 |
| ·其他温度胁迫相关基因的研究 | 第13-14页 |
| ·荧光定量PCR | 第14-17页 |
| ·荧光定量PCR的原理 | 第15-16页 |
| ·荧光定量PCR的类型 | 第16页 |
| ·荧光定量PCR的应用 | 第16-17页 |
| ·农杆菌介导植物遗传转化 | 第17-20页 |
| ·根瘤农杆菌的转化原理 | 第17-18页 |
| ·根瘤农杆菌的转化的特点 | 第18页 |
| ·叶盘法 | 第18页 |
| ·瞬时表达技术 | 第18-20页 |
| 第2章 引言 | 第20-22页 |
| ·实验研究的背景及意义 | 第20-21页 |
| ·本实验的技术路线 | 第21-22页 |
| 第3章 根据已知序列克隆LEA基因及序列分析 | 第22-32页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·主要实验材料 | 第22页 |
| ·主要化学试剂和试剂盒 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·自配的主要试剂和培养基 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·蜡梅总DNA的提取、纯化 | 第23-24页 |
| ·LEA基因PCR克隆与测序 | 第24-27页 |
| ·实验结果与分析 | 第27-29页 |
| ·CTAB法提取蜡梅的基因组DNA | 第27-28页 |
| ·目的基因的扩增 | 第28页 |
| ·LEA基因序列分析 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-32页 |
| 第4章 LEA基因在不同胁迫下表达的荧光定量分析 | 第32-46页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第32页 |
| ·主要试剂和设备 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-37页 |
| ·蜡梅的不同胁迫处理 | 第32页 |
| ·采集蜡梅采集腊梅不同组织、不同花期蜡梅花和花盛开期不同器官 | 第32页 |
| ·总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第32-34页 |
| ·蜡梅LEA基因在不同胁迫下表达的荧光定量分析 | 第34-37页 |
| ·实验结果与分析 | 第37-44页 |
| ·总RNA提取 | 第37-39页 |
| ·引物扩增特异性检测 | 第39页 |
| ·熔解曲线分析 | 第39-40页 |
| ·标准曲线分析 | 第40-42页 |
| ·蜡梅LEA基因在不同胁迫下表达的荧光定量分析 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ·蜡梅LEA基因在不同胁迫下表达的荧光定量分析 | 第45页 |
| ·LEA基因在蜡梅不同组织,花的不同花期、盛花期不同器官的表达特性分析 | 第45-46页 |
| 第5章 LEA基因植物表达载体的构建及烟草转化 | 第46-56页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·主要实验材料 | 第46页 |
| ·主要化学试剂和试剂盒 | 第46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·自配的主要试剂和培养基 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-51页 |
| ·LEA基因的植物表达载体的构建 | 第46-49页 |
| ·获得的植物表达载体pCAM-LEA转化进入根癌农杆菌(LBA4404) | 第49-50页 |
| ·烟草外植体的的遗传转化 | 第50-51页 |
| ·转基因叶片的GUS活性组织化学染色检测 | 第51页 |
| ·实验结果与分析 | 第51-53页 |
| ·加酶切位点的PCR产物验证 | 第51页 |
| ·中间载体pMD-LEA的构建及其双酶切验证 | 第51-52页 |
| ·植物表达载体pCAM-LEA的构建 | 第52页 |
| ·植物表达载体pCAM-LEA转入根癌农杆菌LBA4404的验证 | 第52-53页 |
| ·GUS染色检测 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·植物表达载体pCAM-LEA的构建 | 第54页 |
| ·农杆菌LBA4404的转化 | 第54-55页 |
| ·转基因叶片的GUS活性组织化学染色检测 | 第55-56页 |
| 第6章 结论 | 第56-58页 |
| ·本次实验的主要结论 | 第56页 |
| ·下一步实验 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 缩略词表 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 在学期间发表的文章和参加的课题 | 第68页 |
