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桂花CHS、DFR基因全长克隆、表达分析及表达载体构建

中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 前言第12-19页
    1.1 花色苷的研究第13-18页
        1.1.1 花色苷的化学结构和种类第13-14页
        1.1.2 花色苷的研究历程和进展第14-16页
        1.1.3 花色苷合成相关基因第16-18页
    1.2 本研究的目的意义第18-19页
2 试验材料与方法第19-35页
    2.1 试验材料第19-22页
        2.1.1 植物材料第19-20页
        2.1.2 菌株和质粒第20页
        2.1.3 试验药品及试剂第20页
        2.1.4 主要试剂配制及RNA提取物品的处理第20-21页
        2.1.5 主要仪器及设备第21-22页
    2.2 试验方法第22-35页
        2.2.1 桂花花瓣及叶片总RNA的提取第22-23页
            2.2.1.1 采用改良的CTAB法提取总RNA第22-23页
            2.2.1.2 Trizol法提取桂花总RNA第23页
        2.2.2 总RNA质量检测第23-24页
            2.2.2.1 琼脂糖凝胶电泳法第23-24页
            2.2.2.2 紫外吸收法第24页
        2.2.3 反转录cDNA第一链的合成第24-25页
        2.2.4 中间片段的扩增第25-27页
            2.2.4.1 引物的设计第25页
            2.2.4.2 PCR扩增第25页
            2.2.4.3 目的条带切胶回收第25-26页
            2.2.4.4 目的基因的连接与转化第26页
            2.2.4.5 目的基因的转化第26-27页
            2.2.4.6 阳性克隆的鉴定第27页
            2.2.4.7 中间片段的测序第27页
        2.2.5 5′序列的获得第27-30页
        2.2.6 3′序列的获得第30页
        2.2.7 全长拼接第30页
        2.2.8 OfCHS与OfDFR基因理化性质的分析第30-31页
        2.2.9 基因表达量的测定第31-32页
        2.2.10 表达载体的构建第32-34页
        2.2.11 冻溶法转化农杆菌第34页
        2.2.12 拟南芥的转化、筛选与鉴定第34-35页
3 实验结果与分析第35-55页
    3.1 总RNA的提取第35页
    3.2 OfCHS和OfDFR基因全长的克隆及序列分析第35-52页
        3.2.1 OfCHS基因全长的克隆第35-37页
            3.2.1.1 OfCHS基因中间片段的克隆第35-36页
            3.2.1.2 OfCHS基因全长的获得第36-37页
        3.2.2 OfCHS基因序列分析第37-44页
            3.2.2.1 OfCHS全长序列分析:第37-39页
            3.2.2.2 OfCHS基因理化性质的分析第39-44页
        3.2.3 OfDFR基因全长的克隆第44-47页
            3.2.3.1 5′序列的获得第44页
            3.2.3.2 3′序列的获得第44-45页
            3.2.3.3 全长拼接第45-47页
        3.2.4 桂花OfDFR蛋白的生物信息学分析第47-52页
    3.3 基因的组织表达特性分析第52-54页
        3.3.1 OfCHS、OfDFR在桂花不同器官及花期中的表达第52-53页
        3.3.2 OfCHS、OfDFR在在桂花不同品种花瓣的表达第53-54页
    3.4 植物表达载体的构建与鉴定第54-55页
4 讨论第55-57页
    4.1 查尔酮合成酶基因的功能第55-56页
    4.2 查尔酮合成酶基因与桂花花色相关性的探究第56页
    4.3 二氢黄酮醇还原酶基因的功能第56页
    4.4 二氢黄酮醇还原酶基因与桂花花色相关性的探究第56-57页
5 结论第57-60页
参考文献第60-65页
致谢第65-66页
攻读硕士期间发表的学术论文第66页

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