| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 本论文的缩写词表 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 琥珀酸简介 | 第12-13页 |
| 1.1.1 琥珀酸的理化性质 | 第12页 |
| 1.1.2 琥珀酸的应用及市场需求 | 第12页 |
| 1.1.3 琥珀酸的合成方法 | 第12-13页 |
| 1.2 生产琥珀酸的菌株 | 第13-14页 |
| 1.2.1 天然生产宿主 | 第13-14页 |
| 1.2.2 工程宿主菌 | 第14页 |
| 1.3 利用代谢工程策略提高大肠杆菌合成琥珀酸的研究进展 | 第14-19页 |
| 1.3.1 提高大肠杆菌厌氧琥珀酸合成的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.2 提高大肠杆菌有氧琥珀酸合成的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4 辅因子对琥珀酸生产的影响 | 第19-22页 |
| 1.4.1 细胞氧化还原平衡 | 第19-20页 |
| 1.4.2 胞内ATP水平 | 第20-22页 |
| 1.5 本论文的研究内容及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 利用葡萄糖和木糖比例调节胞内ATP提高琥珀酸产量 | 第24-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-31页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 寡核苷酸序列 | 第25页 |
| 2.1.3 分子生物学实验常用酶 | 第25-26页 |
| 2.1.4 本论文中所使用的试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.5 常用生化试剂与药品 | 第26-27页 |
| 2.1.6 培养基与主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.7 缓冲液以及主要试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.8 实验所用到的仪器和设备 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-33页 |
| 2.2.1 菌种的保藏方法 | 第31页 |
| 2.2.2 细菌基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.3 酵母基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.4 质粒DNA提取 | 第31页 |
| 2.2.5 PCR扩增反应 | 第31-32页 |
| 2.2.6 PCR产物纯化回收 | 第32页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶产物的纯化 | 第32页 |
| 2.2.8 酶切体系和方法 | 第32页 |
| 2.2.9 T4 DNA连接酶连接反应体系 | 第32-33页 |
| 2.2.10 体外组装方法 | 第33页 |
| 2.3 琥珀酸发酵条件 | 第33-34页 |
| 2.3.1 种子活化 | 第33页 |
| 2.3.2 四联罐发酵 | 第33-34页 |
| 2.3.3 3 L发酵罐发酵 | 第34页 |
| 2.4 检测方法 | 第34-36页 |
| 2.4.1 菌体生长情况的测定 | 第34页 |
| 2.4.2 葡萄糖的测定 | 第34-35页 |
| 2.4.3 琥珀酸、木糖以及副产物的测定 | 第35页 |
| 2.4.4 胞内ATP的测定 | 第35页 |
| 2.4.5 构建YL104H菌株的代谢模型以及代谢流平衡分析(FBA) | 第35-36页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第36-44页 |
| 2.5.1 不同碳源发酵生产琥珀酸的性能比较 | 第36-37页 |
| 2.5.2 分析厌氧发酵中工程菌株胞内ATP的水平 | 第37-39页 |
| 2.5.3 优化混合糖比例来调节胞内ATP水平提高琥珀酸产量 | 第39-42页 |
| 2.5.4 利用优化的混合糖发酵罐分批补料发酵生产琥珀酸 | 第42-44页 |
| 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 调节胞内NADH/NAD~+比例和ATP水平提高全阶段琥珀酸产率 | 第45-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-49页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第46-47页 |
| 3.1.2 寡核苷酸序列 | 第47-49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 3.2.1 本实验质粒载体的构建 | 第49页 |
| 3.2.2 其他实验方法 | 第49-50页 |
| 3.3 琥珀酸发酵条件 | 第50页 |
| 3.4 检测方法 | 第50-51页 |
| 3.4.1 胞内NADH/NAD~+的测定 | 第50页 |
| 3.4.2 胞内ATP的测定 | 第50-51页 |
| 3.4.3 其他检测方法 | 第51页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第51-59页 |
| 3.5.1 在双阶段发酵中一致化NADH脱氢酶提高全阶段琥珀酸产率 | 第51-54页 |
| 3.5.2 引入来自酿酒酵母的FRDS1对工程菌株琥珀酸发酵的影响 | 第54-55页 |
| 3.5.3 引入厌氧ATP无效循环对工程菌株琥珀酸发酵的影响 | 第55-57页 |
| 3.5.4 共表达frd与ppsA基因来提高琥珀酸的产率 | 第57-59页 |
| 本章小结 | 第59-60页 |
| 创新性成果 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第74-75页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第75页 |
