| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略符号说明 | 第13-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-21页 |
| 1.1 大肠杆菌耐β内酰胺类抗生素近况 | 第16页 |
| 1.2 β-内酰胺类抗生素的发展近况和耐药机制 | 第16-18页 |
| 1.2.1 β-内酰胺类抗生素的发展近况 | 第16-17页 |
| 1.2.2 β-内酰胺酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.3 β-内酰胺类抗生素的耐药机制 | 第18页 |
| 1.3 整合子-基因盒系统 | 第18-19页 |
| 1.4 立题依据及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 鸡源性大肠杆菌的分离纯化和整合子的检测 | 第21-32页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.2.1.1 实验菌株 | 第21页 |
| 2.2.1.2 培养基 | 第21-22页 |
| 2.2.1.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.1.4 实验器材 | 第23页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.2.1 大肠埃希菌的分离纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 鸡源性大肠杆菌的基因组的提取 | 第24页 |
| 2.2.2.3 PCR检测整合子 | 第24-25页 |
| 2.2.2.4 整合子可变区的基因盒阵列检测 | 第25-26页 |
| 2.2.2.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.2.2.6 大肠埃希菌β-内酰胺酶的检测(淀粉-碘法) | 第26-27页 |
| 2.2.2.7 Rep-PCR对E. coli的分型 | 第27页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第27-30页 |
| 2.3.1 鸡源性E.coli整合子的检测分析 | 第27-28页 |
| 2.3.2 大肠杆菌基因盒阵列分析 | 第28-30页 |
| 2.3.3 大肠杆菌非重复菌株筛选 | 第30页 |
| 2.4 本章小结 | 第30-32页 |
| 第三章 大肠埃希菌药敏实验和β-内酰胺类耐药基因的水平转移检测分析 | 第32-45页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第32-40页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第32-35页 |
| 3.2.1.1 实验菌株 | 第32-33页 |
| 3.2.1.2 实验主要试剂 | 第33页 |
| 3.2.1.3 实验所需抗生素及其配制 | 第33-34页 |
| 3.2.1.4 实验所用溶液及其配制 | 第34-35页 |
| 3.2.1.5 实验所需试剂及仪器 | 第35页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第35-40页 |
| 3.2.2.1 PCR检测β-内酰胺类耐药基因和喹诺酮类耐药基因 | 第35-36页 |
| 3.2.2.2 非重复大肠杆菌的生理分型 | 第36-38页 |
| 3.2.2.3 药敏实验 | 第38-40页 |
| 3.2.2.4 接合转移实验 | 第40页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第40-44页 |
| 3.3.1 非重复大肠杆菌的生理分型 | 第40-42页 |
| 3.3.2 鸡源性大肠埃希菌药敏性分析 | 第42-43页 |
| 3.3.3 鸡源性大肠埃希菌β-内酰胺类耐药基因的转移分析 | 第43-44页 |
| 3.4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 β-内酰胺类耐药基因克隆与克隆菌株耐药性统计分析 | 第45-63页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第45-53页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第45-48页 |
| 4.2.1.1 实验菌株 | 第45-46页 |
| 4.2.1.2 实验所需试剂及其配制 | 第46-47页 |
| 4.2.1.3 实验所需溶剂及仪器 | 第47-48页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第48-53页 |
| 4.2.2.1 β-内酰胺类耐药基因的分型 | 第48页 |
| 4.2.2.2 PCR法获得bla_(CTX-M)和bla_(CMY)各亚型的基因全序列 | 第48页 |
| 4.2.2.3 含有bla_(CTX-M)和bla_(CMY)各亚型基因的克隆菌株的构建 | 第48-53页 |
| 4.2.2.3.1 目标基因的获得 | 第48-49页 |
| 4.2.2.3.2 酶切 | 第49-50页 |
| 4.2.2.3.3 连接 | 第50页 |
| 4.2.2.3.4 制备化转感受态细胞E.coli DH5α(氯化钙法) | 第50-51页 |
| 4.2.2.3.5 连接产物的转化 | 第51页 |
| 4.2.2.3.6 蓝白斑筛选阳性克隆菌株 | 第51-52页 |
| 4.2.2.3.7 重组质粒的鉴定 | 第52-53页 |
| 4.3 克隆菌株目的基因表达的验证 | 第53-54页 |
| 4.3.1 提取克隆菌株的RNA | 第53-54页 |
| 4.3.2 反转录 | 第54页 |
| 4.3.3 PCR法验证 | 第54页 |
| 4.4 克隆菌株耐药性检测 | 第54-55页 |
| 4.5 实验结果与讨论 | 第55-61页 |
| 4.5.1 β-内酰胺类耐药基因的分型 | 第55-57页 |
| 4.5.2 克隆菌株耐药基因的表达验证 | 第57-58页 |
| 4.5.3 耐药性分析 | 第58-61页 |
| 4.5.3.1 不同亚型的β-内酰胺类基因耐药性分析 | 第58-59页 |
| 4.5.3.2 β内酰胺类耐药基因与β内酰胺类抗生素耐药的相关性分析 | 第59-60页 |
| 4.5.3.3 克隆菌株耐药性分析 | 第60-61页 |
| 4.6 本章小结 | 第61-63页 |
| 第六章 全文总结 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读硕士期间所发表的学术文章 | 第70-71页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第71页 |
