| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 L-苏氨酸的理化性质及应用 | 第9-10页 |
| 1.2.1 L-苏氨酸的理化性质 | 第9页 |
| 1.2.2 L-苏氨酸的应用 | 第9-10页 |
| 1.3 L-苏氨酸的生产方法及生产概况 | 第10-11页 |
| 1.3.1 L-苏氨酸的生产方法 | 第10-11页 |
| 1.3.2 L-苏氨酸生产概况 | 第11页 |
| 1.4 国内外直接发酵法生产L-苏氨酸的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.5 大肠杆菌的耐酸系统(ARs) | 第12-13页 |
| 1.6 AR2系统的改造 | 第13-15页 |
| 1.6.1 谷氨酸脱羧酶 | 第13-14页 |
| 1.6.2 谷氨酸转运蛋白GadC | 第14-15页 |
| 1.7 谷氨酸氧化酶LGOD | 第15页 |
| 1.8 AR3系统的改造 | 第15-16页 |
| 1.8.1 精氨酸脱亚胺酶 | 第15-16页 |
| 1.9 大肠杆菌耐热性的改造 | 第16-19页 |
| 1.10 立题背景及主要内容 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2 主要仪器和试剂 | 第21-25页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要溶液 | 第23-24页 |
| 2.2.4 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2.5 抗生素 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.3.1 质粒的小剂量提取 | 第25页 |
| 2.3.2 DNA纯化回收 | 第25-26页 |
| 2.3.3 大肠杆菌基因组的提取 | 第26页 |
| 2.3.4 大肠杆菌化学转化法感受态的制备及转化实验 | 第26-27页 |
| 2.3.5 大肠杆菌电转化法感受态的制备及转化实验 | 第27-28页 |
| 2.3.6 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.3.8 质粒的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.9 利用Red同源重组基因敲除方法 | 第30页 |
| 2.3.10 高效液相色谱法测定发酵液中的氨基酸含量 | 第30-31页 |
| 2.3.11 高效液相色谱法测定发酵液中的有机酸含量 | 第31页 |
| 2.3.12 大肠杆菌发酵L-苏氨酸的培养条件及分析测定方法 | 第31-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-61页 |
| 3.1 大肠杆菌AR2系统的改造 | 第33-43页 |
| 3.1.1 大肠杆菌THRD (pTrc99a-gadBC)的构建 | 第33-34页 |
| 3.1.2 酸性条件下THRD (pTrc99a-gadBC)菌株生产L-苏氨酸的影响 | 第34-36页 |
| 3.1.3 THRD araABD::gadBC菌株的构建 | 第36-39页 |
| 3.1.4 酸性条件下THRD araABD::gadBC菌株生产L-苏氨酸的影响 | 第39-41页 |
| 3.1.5 大肠杆菌THRD (pTrc99a-LGOX)的构建 | 第41页 |
| 3.1.6 酸性条件下THRD (pTrc99a-LGOX)菌株生产L-苏氨酸的影响 | 第41-43页 |
| 3.1.7 AR2系统改造对生产菌发酵L-苏氨酸影响的讨论 | 第43页 |
| 3.2 大肠杆菌AR3系统的改造 | 第43-51页 |
| 3.2.1 大肠杆菌THRD (pTrc99a-arcA)的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.2 酸性条件下THRD (pTrc99a-arcA)菌株生产L-苏氨酸的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.3 THRD araABD::arcA菌株的构建 | 第46-48页 |
| 3.2.4 酸性条件下THRD araABD::arcA菌株生产L-苏氨酸的影响 | 第48-50页 |
| 3.2.5 AR3系统改造对THRD菌株酸性条件下生产L-苏氨酸影响的讨论 | 第50-51页 |
| 3.3 苏氨酸生产菌耐热系统的改造 | 第51-61页 |
| 3.3.1 大肠杆菌THRD (pTrc99a-ectABC)的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.2 高温条件下THRD(pTrc99a-ectABC)菌株生产L-苏氨酸的影响 | 第52-54页 |
| 3.3.3 大肠杆菌THRD (pBV220-hsp20)的构建 | 第54-55页 |
| 3.3.4 高温条件下THRD (pBV220-hsp20)菌株生产L-苏氨酸的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.5 THRD ybeM::hsp20菌株的构建 | 第56-58页 |
| 3.3.6 高温条件THRD ybeM::hsp20菌株生产L-苏氨酸的影响 | 第58-61页 |
| 4 结论 | 第61-63页 |
| 5 展望 | 第63-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-70页 |
| 7 研究生期间所发表论文情况 | 第70-71页 |
| 8 致谢 | 第71页 |
