| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 淀粉加工用酶 | 第9-10页 |
| 1.2 脱支酶种类、特点、研究进展 | 第10-16页 |
| 1.2.1 脱支酶种类 | 第10-11页 |
| 1.2.2 脱支酶底物特异性及空间结构 | 第11-13页 |
| 1.2.3 普鲁兰酶研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.4 异淀粉酶研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 脱支酶应用 | 第16-18页 |
| 1.3.1 在制备高葡萄糖浆中的应用 | 第16-17页 |
| 1.3.2 在制备高麦芽糖浆中的应用 | 第17页 |
| 1.3.3 在制备抗性淀粉中的应用 | 第17-18页 |
| 1.3.4 在啤酒工业中的应用 | 第18页 |
| 1.4 地衣芽胞杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| 1.5 本课题的立题依据与研究内容 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 引物 | 第21-22页 |
| 2.1.3 试剂与酶 | 第22页 |
| 2.1.4 仪器和设备 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要培养基及溶液 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 常规分子克隆操作 | 第24页 |
| 2.2.2 枯草杆菌遗传转化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 地衣芽胞杆菌遗传转化 | 第25页 |
| 2.2.4 碱性蛋白酶基因删除 | 第25-26页 |
| 2.2.5 地衣芽胞杆菌摇瓶发酵 | 第26页 |
| 2.2.6 重组地衣芽胞杆菌遗传稳定性 | 第26-27页 |
| 2.2.7 普鲁兰酶酶活力测定 | 第27页 |
| 2.2.8 异淀粉酶酶活力测定 | 第27-28页 |
| 2.2.9 异淀粉酶酶学性质分析 | 第28-29页 |
| 2.2.10 麦芽糖制备及糖液组分HPLC分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与讨论 | 第30-49页 |
| 3.1 地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶基因apr删除 | 第30-33页 |
| 3.1.1 删除突变盒的构建 | 第30-31页 |
| 3.1.2 目的基因的删除 | 第31-32页 |
| 3.1.3 地衣芽胞杆菌Z902、Z113摇瓶发酵检测胞外蛋白酶活 | 第32-33页 |
| 3.2 普鲁兰酶在地衣芽胞杆菌中的游离表达 | 第33-36页 |
| 3.2.1 普鲁兰酶重组菌Z902/pulB、Z113/pulB构建 | 第34页 |
| 3.2.2 普鲁兰酶重组菌产酶特征 | 第34-35页 |
| 3.2.3 普鲁兰酶重组菌遗传稳定性分析 | 第35-36页 |
| 3.3 异淀粉酶在地衣芽胞杆菌中的游离表达 | 第36-41页 |
| 3.3.1 重组菌Z902/ISO构建 | 第36-37页 |
| 3.3.2 重组菌Z113/ISO构建 | 第37页 |
| 3.3.3 异淀粉酶重组菌产酶特征 | 第37页 |
| 3.3.4 异淀粉酶重组菌遗传稳定性分析 | 第37-38页 |
| 3.3.5 异淀粉酶酶学性质分析 | 第38-41页 |
| 3.4 普鲁兰酶和异淀粉酶在麦芽糖制备中的应用探索 | 第41-44页 |
| 3.5 普鲁兰酶在地衣芽胞杆菌中的整合表达 | 第44-49页 |
| 3.5.1 整合型T2-apr::pulB载体构建 | 第44-46页 |
| 3.5.2 载体T2-apr::pulB电转化Z902 | 第46页 |
| 3.5.3 普鲁兰酶基因整合表达诱导 | 第46-47页 |
| 3.5.4 整合型普鲁兰酶重组菌产酶特征及其遗传稳定性 | 第47-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 5 展望 | 第50-51页 |
| 6 参考文献 | 第51-59页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文 | 第59-60页 |
| 8 致谢 | 第60页 |
