| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第18-23页 |
| 1.1 黑曲霉概述 | 第18页 |
| 1.2 生物体内超氧化物歧化酶及过氧化氢酶相关概述 | 第18-19页 |
| 1.3 基因敲除技术概述 | 第19-20页 |
| 1.4 黑曲霉与采后果蔬腐败 | 第20-21页 |
| 1.5 课题研究的目的、意义及内容 | 第21-23页 |
| 1.5.1 课题研究的目的及意义 | 第21页 |
| 1.5.2 课题研究的内容 | 第21-23页 |
| 第二章 黑曲霉sodC缺失突变体的构建 | 第23-36页 |
| 2.1 实验材料、试剂及设备 | 第24-28页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 黑曲霉sodC基因敲除载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.2 黑曲霉原生质体制备及聚乙二醇转化 | 第30-31页 |
| 2.2.3 黑曲霉sodC缺失体的筛选 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-35页 |
| 2.3.1 sod C 侧翼片段 AB、CD 和 ABCD 的 PCR 合成及纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.2 sodC侧翼片段ABCD和pC3质粒的连接及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.3 黑曲霉sodC缺失体的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.4 黑曲霉 ΔsodC 的菌丝体观察及 qPCR 鉴定 | 第35页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第35-36页 |
| 第三章 黑曲霉体内sodC基因功能的研究 | 第36-51页 |
| 3.1 实验材料、试剂及设备 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 主要设备 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 黑曲霉变体 ΔsodC生长状况的观察 | 第37页 |
| 3.2.2 黑曲霉菌丝体生长的观察 | 第37页 |
| 3.2.3 黑曲霉菌体孢子萌发情况的观察 | 第37页 |
| 3.2.4 黑曲霉体内ROS的荧光染色 | 第37-38页 |
| 3.2.5 黑曲霉体内SOD活性、GSH、ROS和MDA含量的测定 | 第38-40页 |
| 3.2.6 黑曲霉在抗坏血酸条件下生长的观察 | 第40-41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-49页 |
| 3.3.1 黑曲霉突变体 ΔsodC的生长状况 | 第41-42页 |
| 3.3.2 不同非生物氧化胁迫条件对黑曲霉生长的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.3 不同非生物氧化胁迫条件对黑曲霉孢子萌发的影响 | 第43-45页 |
| 3.3.4 甲萘醌对黑曲霉体内ROS影响的荧光检测 | 第45-46页 |
| 3.3.5 甲萘醌对黑曲霉体内SOD活性、GSH、ROS和MDA含量的影响 | 第46-48页 |
| 3.3.6 抗坏血酸缓解甲萘醌对黑曲霉菌丝体生长的抑制 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第49-51页 |
| 第四章 黑曲霉对果实侵染的机制研究 | 第51-62页 |
| 4.1 实验材料、试剂及设备 | 第51-52页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 黑曲霉体内SOD活性、GSH、ROS和MDA含量的测定 | 第52页 |
| 4.2.2 黑曲霉突变体 ΔsodC对采后果实侵染能力的检测 | 第52页 |
| 4.2.3 黑曲霉侵染后梨中ROS和MDA含量的检测 | 第52-53页 |
| 4.2.4 黑曲霉菌体内多种SOD编码基因的表达水平分析 | 第53-55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-60页 |
| 4.3.1 黑曲霉体内SOD活性、GSH、ROS和MDA含量变化 | 第55-57页 |
| 4.3.2 黑曲霉突变体 ΔsodC对采后果实的侵染能力 | 第57-58页 |
| 4.3.3 黑曲霉侵染后梨中ROS和MDA含量的变化 | 第58-59页 |
| 4.3.4 黑曲霉菌体体内多种SOD编码基因的表达水平分析 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第60-62页 |
| 第五章 黑曲霉突变体 ΔcatA表型分析 | 第62-71页 |
| 5.1 实验材料、试剂及设备 | 第62页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第62页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 5.1.3 主要设备 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-65页 |
| 5.2.1 黑曲霉突变体 ΔcatA的获得 | 第62-63页 |
| 5.2.2 黑曲霉突变体 ΔcatA生长状况的观察及CAT酶活性的测定 | 第63-64页 |
| 5.2.3 黑曲霉突变体 ΔcatA对采后果实侵染能力的检测 | 第64页 |
| 5.2.4 黑曲霉突变体 ΔcatA对H_2O_2敏感性的检测 | 第64-65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-69页 |
| 5.3.1 黑曲霉突变体 ΔcatA的PCR鉴定 | 第65-66页 |
| 5.3.2 黑曲霉突变体 ΔcatA生长状况及CAT酶活性 | 第66-67页 |
| 5.3.3 黑曲霉突变体 ΔcatA对采后果实的侵染能力 | 第67-68页 |
| 5.3.4 黑曲霉突变体 ΔcatA对H_2O_2敏感性 | 第68-69页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
