分子改造提高酸性α-淀粉酶热稳定性
| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-26页 |
| 1.1 淀粉酶 | 第11-16页 |
| 1.1.1 淀粉酶的分类 | 第11页 |
| 1.1.2 酸性α-淀粉酶的工业应用 | 第11-14页 |
| 1.1.3 酸性α-淀粉酶结构及保守域 | 第14-16页 |
| 1.2 酸性α-淀粉酶的耐热性 | 第16-19页 |
| 1.2.1 酸性α-淀粉酶的耐热机理 | 第16-17页 |
| 1.2.2 淀粉酶热稳定性相关位点 | 第17-19页 |
| 1.3 酶的定向改造方法 | 第19-21页 |
| 1.3.1 酶的非理性设计 | 第19-20页 |
| 1.3.2 酶的理性设计 | 第20-21页 |
| 1.4 基因定点突变技术原理与方法 | 第21-24页 |
| 1.4.1 寡核苷酸定向诱变 | 第22-23页 |
| 1.4.2 盒式诱变 | 第23页 |
| 1.4.3 重叠延伸PCR | 第23页 |
| 1.4.4 全质粒扩增诱变 | 第23-24页 |
| 1.5 本课题研究目的及意义 | 第24-26页 |
| 第2章 热稳定性提高的酸性α-淀粉酶的初步筛选 | 第26-38页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 菌株、质粒和试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.2 确定热稳定性相关位点的方法 | 第27页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态制备 | 第27-28页 |
| 2.2.4 大肠杆菌转化 | 第28页 |
| 2.2.5 突变α-淀粉酶基因 | 第28-30页 |
| 2.2.6 突变酶在大肠杆菌中诱导表达 | 第30页 |
| 2.2.7 DNS试剂测还原糖含量标准曲线 | 第30-31页 |
| 2.2.8 α-淀粉酶的酶活力测定 | 第31页 |
| 2.2.9 初筛热稳定性提高的α-淀粉酶 | 第31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-37页 |
| 2.3.1 确定热稳定性相关位点 | 第31-34页 |
| 2.3.2 突变α-淀粉酶基因 | 第34-36页 |
| 2.3.3 初筛热稳定性提高的突变α-淀粉酶 | 第36-37页 |
| 2.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第3章 热稳定性提高的突变酶的纯化及酶学性质 | 第38-54页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 突变酶在大肠杆菌中诱导表达 | 第39页 |
| 3.3.2 淀粉酶蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.3 蛋白SDS-PAGE方法 | 第40页 |
| 3.3.4 Bradford法测蛋白浓度 | 第40-41页 |
| 3.3.6 α-淀粉酶的酶动力学参数测定 | 第41页 |
| 3.3.7 淀粉酶半衰期测定方法 | 第41-42页 |
| 3.3.8 最适温度和最适pH测定 | 第42页 |
| 3.4 结果和讨论 | 第42-53页 |
| 3.4.1 原始酶纯化条件优化 | 第42-44页 |
| 3.4.2 突变酶的蛋白纯化 | 第44-47页 |
| 3.4.3 纯化倍数和回收率计算 | 第47-49页 |
| 3.4.4 不同温度下的半衰期 | 第49-51页 |
| 3.4.5 最适温度和最适pH值 | 第51页 |
| 3.4.6 酶动力学参数 | 第51-53页 |
| 3.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第4章 同源建模和热稳定性相关位点分析 | 第54-59页 |
| 4.1 前言 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-58页 |
| 4.3.1 同源建模得三维结构模型 | 第54-55页 |
| 4.3.2 IG181-182~*突变位点分析 | 第55-56页 |
| 4.3.3 C363G和N463T突变位点分析 | 第56-57页 |
| 4.3.4 催化效率下降的原因分析 | 第57-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第5章 总结与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 全文总结 | 第59-60页 |
| 5.2 创新点 | 第60页 |
| 5.3 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 论文发表 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
