| 摘要 | 第3-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 SOX2分子研究现状 | 第18-20页 |
| 1.2 基因组靶向编辑技术简介 | 第20-25页 |
| 1.2.1 锌指核酸酶(ZFN) | 第20-22页 |
| 1.2.2 转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN) | 第22-23页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas系统 | 第23-25页 |
| 1.2.4 使用荧光素酶报告基因进行药物筛选及基因功能研究的原理 | 第25页 |
| 1.3 本课题的立项意义 | 第25-28页 |
| 第2章 两种SOX2-Luciferase HEK293细胞系的建立及其鉴定 | 第28-58页 |
| 2.1 引言 | 第28-29页 |
| 2.2 本章技术流程示意图 | 第29页 |
| 2.3 实验材料 | 第29-35页 |
| 2.3.1 菌株、细胞及质粒载体 | 第29-31页 |
| 2.3.2 材料及试剂 | 第31页 |
| 2.3.3 试剂的配制 | 第31-33页 |
| 2.3.4 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.3.5 相关引物列表 | 第34-35页 |
| 2.4 实验方法 | 第35-47页 |
| 2.4.1 靶向SOX2基因的TALEN核酸酶表达载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.4.2 靶向SOX2基因的打靶载体的构建 | 第38-42页 |
| 2.4.3 细胞转染 | 第42-43页 |
| 2.4.4 T7 E1 assay法检测TALEN核酸酶打靶效率 | 第43-46页 |
| 2.4.5 基于有限稀释法的细胞克隆化 | 第46页 |
| 2.4.6 基于PCR的方法检测细胞重组 | 第46-47页 |
| 2.4.7 Sourthern Blot | 第47页 |
| 2.5 实验结果 | 第47-56页 |
| 2.5.1 靶向SOX2基因的TALEN表达载体及打靶载体的获得 | 第47-50页 |
| 2.5.2 SOX2P-Luciferase及SOX2P-SOX2-T2A-Luciferase细胞系的建立 | 第50-52页 |
| 2.5.3 SOX2P-Luciferase及SOX2P-SOX2-T2A-Luciferase细胞系的鉴定 | 第52-56页 |
| 2.6 讨论 | 第56-58页 |
| 第3章 两种SOX2-Luciferase HEK293细胞系的转录激活实验研究 | 第58-82页 |
| 3.1 引言 | 第58-59页 |
| 3.2 本章技术流程示意图 | 第59页 |
| 3.3 实验材料 | 第59-62页 |
| 3.3.1 菌株、细胞及质粒载体 | 第59-60页 |
| 3.3.2 材料及试剂 | 第60-61页 |
| 3.3.3 试剂的配制 | 第61页 |
| 3.3.4 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 3.3.5 相关引物列表 | 第62页 |
| 3.4 实验方法 | 第62-71页 |
| 3.4.1 转录激活元件的获得 | 第62-64页 |
| 3.4.2 靶向SOX2基因的sgRNA的设计及合成 | 第64-65页 |
| 3.4.3 相关质粒载体的构建 | 第65-68页 |
| 3.4.4 细胞转染 | 第68-69页 |
| 3.4.5 荧光素酶报告基因的表达测定 | 第69-70页 |
| 3.4.6 Real-time PCR | 第70-71页 |
| 3.5 实验结果 | 第71-80页 |
| 3.5.1 基于CRISPR/dCas技术的转录激活系统的建立 | 第71-74页 |
| 3.5.2 转录激活系统的测试与优化 | 第74-77页 |
| 3.5.3 转录激活系统对SOX2P-Luciferase和SOX2P-SOX2-T2A-Luciferase细胞系的转录激活验证 | 第77-80页 |
| 3.6 讨论 | 第80-82页 |
| 第4章 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 附录 | 第90-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第106页 |
