| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 植物病毒侵染以及植物的抗病机制 | 第12-16页 |
| 1.2 MicroRNA的特点及其在基因表达调节中的作用 | 第16-18页 |
| 1.3 植物microRNA及其与抗病性的关系 | 第18-20页 |
| 1.4 大豆花叶病毒的研究现状 | 第20-22页 |
| 1.5 Microarray技术 | 第22-23页 |
| 1.6 研究内容及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 结果与分析 | 第24-81页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第24-53页 |
| 2.1.1 寄主培养与病毒接种 | 第24页 |
| 2.1.2 SMV检测PCR引物的设计 | 第24-25页 |
| 2.1.3 大豆叶片总RNA的提取方法 | 第25页 |
| 2.1.4 小RNA的提取方法 | 第25-26页 |
| 2.1.5 小RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测 | 第26页 |
| 2.1.6 Microarray芯片分析 | 第26-27页 |
| 2.1.7 对差异表达miRNA靶标基因的预测 | 第27-28页 |
| 2.1.8 成熟miRNA的qRT-PCR检测引物的设计 | 第28页 |
| 2.1.9 miRNA的反转录 | 第28-29页 |
| 2.1.10 miRNA的qRT-PCR检测实验 | 第29-30页 |
| 2.1.11 对miRNA的表达量进行数据分析 | 第30-31页 |
| 2.1.12 差异表达miRNA的Northern杂交检测 | 第31-32页 |
| 2.1.13 表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.1.14 植物材料 | 第33页 |
| 2.1.15 扩增pre-miRNA的引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| 2.1.16 靶位点对应寡核苷酸链的设计与合成 | 第34-36页 |
| 2.1.17 检测靶位点有效性的p3'UTR_gene_TS重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| 2.1.18 过表达miRNA的重组质粒pGus_miR的构建 | 第38-41页 |
| 2.1.19 抑制miRNA的STTM重组质粒pGus_miR_STTM的构建 | 第41-43页 |
| 2.1.20 双荧光素酶报告系统检测分析实验(dual-luciferase reporter assay) | 第43-44页 |
| 2.1.21 F-Luc和R-Luc mRNA水平的qRT-PCR验证 | 第44-45页 |
| 2.1.22 SMV侵染样品mRNA的纯化分离 | 第45页 |
| 2.1.23 5'-RACE Adaptor的连接 | 第45-46页 |
| 2.1.24 反转录反应 | 第46页 |
| 2.1.25 克隆基因并测序验证 | 第46-49页 |
| 2.1.26 回收DNA连接到pGM-T载体中 | 第49-50页 |
| 2.1.27 质粒DNA的提取 | 第50页 |
| 2.1.28 重组质粒的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.1.29 DNA片段的测序 | 第51页 |
| 2.1.30 侵染实验的设计 | 第51页 |
| 2.1.31 靶标基因mRNA水平检测的qPCR引物设计 | 第51-53页 |
| 2.2 结果与分析 | 第53-80页 |
| 2.2.1 SMV侵染的表型及统计分析 | 第53-54页 |
| 2.2.2 侵染叶片上SMV的分子鉴定 | 第54页 |
| 2.2.3 PAGE电泳检测small RNA的质量 | 第54-55页 |
| 2.2.4 SMV侵染后大豆miRNA表达谱的变化 | 第55-58页 |
| 2.2.5 差异表达miRNA靶标基因的分析 | 第58-60页 |
| 2.2.6 差异表达miRNA的表达验证 | 第60-63页 |
| 2.2.7 Pre-miRNAs序列的扩增 | 第63页 |
| 2.2.8 pGUS_miR过表达miRNA重组质粒的构建 | 第63-66页 |
| 2.2.9 pGUS_miR_STTM抑制miRNA重组质粒的构建 | 第66-67页 |
| 2.2.10 p3'UTR_gene_TS重组质粒的PCR检测结果 | 第67-68页 |
| 2.2.11 重组质粒的农杆菌转化 | 第68-71页 |
| 2.2.12 双荧光素酶实验检测靶标片段的有效性 | 第71-73页 |
| 2.2.13 Inner PCR的分析 | 第73-74页 |
| 2.2.14 重组质粒的Inner PCR分析 | 第74-75页 |
| 2.2.15 重组质粒的酶切鉴定 | 第75-76页 |
| 2.2.16 RLM-RACE序列分析 | 第76-78页 |
| 2.2.17 SMV侵染后miRNA及其靶标基因表现出了相反的表达模式 | 第78-80页 |
| 2.3 结论 | 第80-81页 |
| 第三章 讨论 | 第81-85页 |
| 参考文献 | 第85-92页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
