| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 缩略词表 | 第17-18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-25页 |
| 一、FNDC5的研究进展 | 第19-21页 |
| 二、内质网定位信号和蛋白糖基化修饰对分泌蛋白定位的影响 | 第21-23页 |
| 三、骨骼肌的分泌功能和脂肪组织的研究进展 | 第23-25页 |
| 第二章 FNDC5信号肽和跨膜结构域定位功能的检测 | 第25-32页 |
| 引言 | 第25页 |
| 1.1 材料 | 第25-26页 |
| 1.1.1 生物学网站与软件 | 第25页 |
| 1.1.2 细胞系及菌株 | 第25-26页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第26页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第26页 |
| 1.2 方法 | 第26-27页 |
| 1.2.1 FNDC5信号肽、跨膜结构域和irisin序列分析 | 第26页 |
| 1.2.2 信号肽、跨膜结构域和FNDC5表达载体的构建及检测 | 第26-27页 |
| 1.2.3 信号肽、跨膜结构域和FNDC5融合蛋白的亚细胞定位观察 | 第27页 |
| 1.3 结果 | 第27-30页 |
| 1.3.1 FNDC5信号肽、跨膜结构域和irisin序列分析 | 第27-28页 |
| 1.3.2 信号肽、跨膜结构域和FNDC5融合蛋白的检测 | 第28-29页 |
| 1.3.3 信号肽、跨膜结构域和FNDC5融合蛋白的亚细胞定位 | 第29-30页 |
| 1.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 FNDC5剪切作用及IRISIN分泌过程的研究 | 第32-39页 |
| 引言 | 第32页 |
| 1.1 材料 | 第32-33页 |
| 1.1.1 细胞系及菌株 | 第32页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 1.2 方法 | 第33-34页 |
| 1.2.1 pEGFP-FNDC5表达载体的构建 | 第33页 |
| 1.2.2 pDsRed2-EGFP和pDsred2-FNDC5-EGFP表达载体的构建 | 第33页 |
| 1.2.3 EGFP-FNDC5和Dsred2-FNDC5-EGFP蛋白的亚细胞定位观察 | 第33-34页 |
| 1.2.4 FNDC5-EYFP、EGFP-FNDC5和Dsred2-FNDC5-EGFP蛋白剪切产物的分 | 第34页 |
| 1.3 结果 | 第34-36页 |
| 1.3.1 EGFP-FNDC5和Dsred2-FNDC5-EGFP蛋白及其剪切产物的亚细胞定位 | 第34-35页 |
| 1.3.2 FNDC5-EYFP、EGFP-FNDC5和Dsred2-FNDC5-EGFP蛋白及其剪切产物的分析 | 第35-36页 |
| 1.4 讨论 | 第36-39页 |
| 第四章 FNDC5蛋白N-连接糖基化修饰的检测 | 第39-44页 |
| 引言 | 第39页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第39页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第40页 |
| 1.2 方法 | 第40-41页 |
| 1.2.1 肌肉组织总蛋白的提取 | 第40页 |
| 1.2.2 肌肉组织总蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| 1.2.3 肌肉组织总蛋白的PNGase F和Endo H酶切 | 第40-41页 |
| 1.2.4 FNDC5蛋白N-连接糖基化修饰的检测 | 第41页 |
| 1.3 结果 | 第41-42页 |
| 1.3.1 肌肉组织总蛋白浓度的测定 | 第41-42页 |
| 1.3.2 FNDC5蛋白N-连接糖基化修饰的检测 | 第42页 |
| 1.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 FNDC5的N-连接糖基化修饰对IRISIN分泌影响的研究 | 第44-53页 |
| 引言 | 第44页 |
| 1.1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1 生物学网站与软件 | 第44页 |
| 1.1.2 细胞系及菌株 | 第44-45页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第45页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第45页 |
| 1.2 方法 | 第45-47页 |
| 1.2.1 FNDC5蛋白N-连接糖基化修饰位点分析 | 第45页 |
| 1.2.2 N-连接糖基化修饰位点点突变载体的构建 | 第45-46页 |
| 1.2.3 N-连接糖基化修饰位点点突变蛋白的亚细胞定位观察 | 第46页 |
| 1.2.4 N-连接糖基化修饰位点点突变蛋白的提取 | 第46-47页 |
| 1.2.5 N-连接糖基化修饰位点点突变蛋白的PNGase F酶切 | 第47页 |
| 1.2.6 N-连接糖基化修饰位点点突变蛋白的N-连接糖基化修饰的检测 | 第47页 |
| 1.3 结果 | 第47-51页 |
| 1.3.1 FNDC5蛋白N-连接糖基化修饰位点分析 | 第47-48页 |
| 1.3.2 N-连接糖基化修饰位点点突变载体的构建 | 第48-49页 |
| 1.3.3 N-连接糖基化修饰位点点突变蛋白的亚细胞定位 | 第49-50页 |
| 1.3.4 N-连接糖基化修饰位点点突变蛋白的N-连接糖基化修饰的检测 | 第50-51页 |
| 1.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第六章 白色与棕色脂肪细胞的分离和鉴定 | 第53-60页 |
| 引言 | 第53页 |
| 1.1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第53页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第54页 |
| 1.2 方法 | 第54-56页 |
| 1.2.1 白色与棕色脂肪细胞的分离和培养 | 第54页 |
| 1.2.2 白色与棕色脂肪细胞的免疫荧光鉴定 | 第54-55页 |
| 1.2.3 白色与棕色脂肪细胞的荧光定量PCR和Western blotting鉴定 | 第55-56页 |
| 1.3 结果 | 第56-58页 |
| 1.3.1 白色与棕色脂肪细胞的分离和培养 | 第56页 |
| 1.3.2 白色与棕色脂肪细胞的免疫荧光鉴定 | 第56-57页 |
| 1.3.3 白色与棕色脂肪细胞的荧光定量PCR和Western blotting鉴定 | 第57-58页 |
| 1.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 小鼠FNDC5组织表达谱的检测 | 第60-66页 |
| 引言 | 第60页 |
| 1.1 材料 | 第60-61页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第60页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第60-61页 |
| 1.2 方法 | 第61-63页 |
| 1.2.1 组织RNA提取和反转录 | 第61-62页 |
| 1.2.2 FNDC5基因组织表达谱的检测 | 第62页 |
| 1.2.3 组织蛋白提取 | 第62页 |
| 1.2.4 组织总蛋白浓度的测定 | 第62-63页 |
| 1.2.5 FNDC5蛋白组织表达谱的检测 | 第63页 |
| 1.3 结果 | 第63-65页 |
| 1.3.1 FNDC5基因组织表达谱的检测 | 第63-64页 |
| 1.3.2 组织蛋白浓度的测定 | 第64页 |
| 1.3.3 FNDC5蛋白组织表达谱的检测 | 第64-65页 |
| 1.4 讨论 | 第65-66页 |
| 第八章 FNDC5和IRISIN的原核表达 | 第66-73页 |
| 引言 | 第66页 |
| 1.1 材料 | 第66-67页 |
| 1.1.1 菌株和载体 | 第66页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第66-67页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第67页 |
| 1.2 方法 | 第67-69页 |
| 1.2.1 FNDC5和irisin引物设计 | 第67页 |
| 1.2.2 PGEX-4T-1-FNDC5和PGEX-4T-1-irisin原核表达载体构建 | 第67-68页 |
| 1.2.3 GST-FNDC5和GST-irisin蛋白的考马斯亮蓝染色 | 第68-69页 |
| 1.2.4 GST-FNDC5和GST-irisin蛋白的纯化及抗体特异性检测 | 第69页 |
| 1.3 结果 | 第69-71页 |
| 1.3.1 PGEX-4T-1-FNDC5和PGEX-4T-1-irisin原核表达载体的鉴定 | 第69-70页 |
| 1.3.2 GST-FNDC5和GST-irisin蛋白的检测 | 第70页 |
| 1.3.3 GST-FNDC5和GST-irisin蛋白的纯化及抗体特异性检测 | 第70-71页 |
| 1.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第九章 IRISIN促进白色脂肪棕色化作用机制的初步探讨 | 第73-78页 |
| 引言 | 第73页 |
| 1.1 材料 | 第73-74页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第73-74页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第74页 |
| 1.2 方法 | 第74-75页 |
| 1.2.1 GST-irisin蛋白浓度的测定 | 第74页 |
| 1.2.2 GST-irisin最佳使用浓度的确定 | 第74页 |
| 1.2.3 蛋白激酶p38、ERK和AKT蛋白的磷酸化水平的检测 | 第74-75页 |
| 1.3 结果 | 第75-76页 |
| 1.3.1 GST-irisin最佳使用浓度的确定 | 第75页 |
| 1.3.2 蛋白激酶p38、ERK和AKT蛋白的磷酸化水平的检测 | 第75-76页 |
| 1.4 讨论 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 有待进一步研究的内容 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-95页 |
| 附录 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读博士期间发表的论文目录 | 第98页 |
