| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 英文缩略词 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| ·黑眶蟾蜍简介 | 第18-19页 |
| ·丝氨酸蛋白酶 | 第19-20页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂家族 | 第20-22页 |
| ·概述 | 第20-21页 |
| ·分类 | 第21-22页 |
| ·论文选题意义及研究内容 | 第22-25页 |
| ·论文选题意义 | 第22页 |
| ·研究内容 | 第22-25页 |
| 第二章 Hylaserpin analogues cDNA序列的获得及其生物信息学分析 | 第25-43页 |
| ·材料和方法 | 第25-33页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·实验菌株、实验动物和质粒 | 第25页 |
| ·主要实验试剂 | 第25页 |
| ·实验用到的主要实验仪器 | 第25-26页 |
| ·其他 | 第26页 |
| ·cDNA逆转录前的实验动物处理 | 第26-27页 |
| ·黑眶蟾蜍总RNA提取 | 第27页 |
| ·黑眶蟾蜍cDNA的合成 | 第27-29页 |
| ·反转录及扩增所用引物 | 第27-28页 |
| ·一链cDNA合成 | 第28-29页 |
| ·黑眶蟾蜍胰蛋白酶抑制剂开放阅读框的扩增 | 第29-32页 |
| ·扩增黑眶蟾蜍胰蛋白酶抑制剂序列 | 第29-30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·热击转化 | 第31-32页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第32页 |
| ·黑眶蟾蜍胰蛋白酶抑制剂全长ORF的获取 | 第32页 |
| ·运用软件对Hylaserpin analogues进行生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·实验结果 | 第33-41页 |
| ·Hylaserpin analogues开放阅读框的获得 | 第33-34页 |
| ·Hylaserpin analogues的生物信息学分析 | 第34-41页 |
| ·信号肽预测与糖基化位点预测 | 第34-36页 |
| ·理化性质 | 第36-38页 |
| ·二级结构分析 | 第38-39页 |
| ·多重序列的比对 | 第39-41页 |
| ·Hylaserpin analogues三级结构预测 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 Hylaserpin analogues的表达、纯化及性质检测 | 第43-65页 |
| ·材料和方法 | 第43-56页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·实验菌株、细胞和质粒 | 第43页 |
| ·主要实验试剂 | 第43-44页 |
| ·主要实验仪器 | 第44-45页 |
| ·Hylaserpin analogues基因的克隆 | 第45-48页 |
| ·Hylaserpin analogues开放阅读框的获得 | 第45-47页 |
| ·构建克隆载体 | 第47页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·热击转化 | 第47页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第47-48页 |
| ·Hylaserpin analogues表达载体构建 | 第48-50页 |
| ·提取融合质粒 | 第48-49页 |
| ·融合质粒与pET-32a载体的酶切 | 第49页 |
| ·目的基因和pET-32a载体的连接与转化 | 第49-50页 |
| ·目的基因和pET-32a载体的连接与转化 | 第50页 |
| ·Hylaserpin analogues重组蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·目的基因和pET-32a载体的连接与转化 | 第50页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·Hylaserpin analogues目的蛋白的纯化 | 第51-54页 |
| ·Hylaserpin analogues蛋白的纯化 | 第51-53页 |
| ·肠激酶消化Hylaserpin analogues蛋白 | 第53页 |
| ·Hylaserpin analogues蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·Hylaserpin analogeu的活性检测 | 第54-56页 |
| ·Hylaserpin analogues对胰蛋白酶的抑制常数测定 | 第54页 |
| ·2μM Hylaserpin analogues在不同pH条件下对胰蛋白酶的抑制实验 | 第54-55页 |
| ·2μM Hylaserpin analogues对肿瘤细胞抑制情况 | 第55-56页 |
| ·Hylaserpin analogues对细菌的抑制情况 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-62页 |
| ·Hylaserpin analogeu的表达及纯化 | 第56-58页 |
| ·Hylaserpin analogues对胰蛋白酶的抑制 | 第58-61页 |
| ·2μM Hylaserpin analogues在不同pH条件下对胰蛋白酶的抑制 | 第58-59页 |
| ·不同浓度Hylaserpin analogues对胰蛋白酶的抑制常数测定 | 第59页 |
| ·不同浓度Hylaserpin analogues对胰蛋白酶的抑制 | 第59-61页 |
| ·Hylaserpin analogues对肿瘤细胞的抑制 | 第61-62页 |
| ·Hylaserpin analogues对细菌的抑制 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 总结与展望 | 第65-69页 |
| ·总结 | 第65-66页 |
| ·展望 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录A：溶液与培养基的配置 | 第79-85页 |
| 附录B：攻读硕士期间参与发表的论文和发明专利 | 第85页 |
