| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| ·羊痘病毒简介 | 第13-14页 |
| ·羊痘病毒的病原学特征 | 第13页 |
| ·羊痘病毒的流行及危害 | 第13-14页 |
| ·双链RNA依赖的蛋白激酶（PKR） | 第14-20页 |
| ·PKR的结构特点 | 第14-15页 |
| ·PKR的激活 | 第15-16页 |
| ·PKR的生化活性 | 第16-18页 |
| ·细胞和病毒因子对PKR作用的调节 | 第18-20页 |
| ·研究目标及展望 | 第20-21页 |
| 第二章 SPPV感染对细胞内PKR-eIF2α通路的影响 | 第21-26页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·毒株和细胞 | 第21页 |
| ·主要试剂与抗体 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-22页 |
| ·细胞的复苏与传代 | 第21-22页 |
| ·病毒灭活 | 第22页 |
| ·病毒感染 | 第22页 |
| ·细胞蛋白样品的收集 | 第22页 |
| ·Western blot | 第22页 |
| ·结果 | 第22-24页 |
| ·SPPV感染细胞能够激活PKR-eIF2α通路 | 第22-23页 |
| ·UV灭活的SPPV感染细胞后不能激活PKR | 第23-24页 |
| ·SPPV激活PKR-eIF2α信号通路存在剂量依赖性 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 PKR在细胞抗SPPV感染中的作用 | 第26-37页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·PKR真核表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·PKR真核表达载体的转染 | 第28页 |
| ·PKR siRNA的筛选与合成 | 第28页 |
| ·siRNA的转染及效果验证 | 第28页 |
| ·PKR对细胞内SPPV复制的影响 | 第28-29页 |
| ·病毒TCID50的测定方法 | 第29页 |
| ·SPPV实时荧光定量PCR检测方法 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-35页 |
| ·PKR基因的扩增及克隆载体的鉴定 | 第29-30页 |
| ·PKR基因真核表达载体的鉴定 | 第30-31页 |
| ·PKR siRNA的筛选 | 第31页 |
| ·PKR过表达对细胞内SPPV复制的影响 | 第31-33页 |
| ·靶向干扰PKR表达对细胞内SPPV复制的影响 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 PKR在羊痘病毒诱导干扰素中的作用 | 第37-43页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·毒株和细胞 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·引物的设计与合成 | 第37-38页 |
| ·SPPV病毒感染细胞 | 第38页 |
| ·Poly(I:C)处理HeLa细胞 | 第38页 |
| ·siRNA转染细胞 | 第38-39页 |
| ·Trizol法提取细胞RNA | 第39页 |
| ·关于IFN-β的荧光定量PCR方法 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-41页 |
| ·引物的筛选与优化 | 第40页 |
| ·SPPV感染细胞后IFN-β的检测 | 第40-41页 |
| ·转染siPKR的细胞感染SPPV后IFN-β的检测 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 PKR与羊痘病毒K3L蛋白之间的作用关系 | 第43-50页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·K3L引物的设计与合成 | 第43-44页 |
| ·细胞接种SPPVGL株细胞毒 | 第44页 |
| ·Trizol法提取细胞RNA | 第44页 |
| ·K3L与PKR重组质粒的共转染 | 第44页 |
| ·间接免疫荧光 | 第44-45页 |
| ·免疫共沉淀 | 第45页 |
| ·Real-time PCR | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-48页 |
| ·PKR与SPPV K3L蛋白的共定位 | 第46页 |
| ·PKR与SPPV K3L蛋白的免疫共沉淀 | 第46-47页 |
| ·SPPV感染细胞后K3L mRNA水平的变化 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第六章 全文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
