| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩写表 | 第10-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-24页 |
| ·冷胁迫对玉米的影响及抗冷基因的研究进展 | 第15-19页 |
| ·冷胁迫对玉米的影响 | 第15-16页 |
| ·抗冷基因及RLK的研究进展 | 第16-19页 |
| ·玉米转基因研究进展 | 第19-23页 |
| ·玉米转基因受体材料 | 第19-20页 |
| ·转基因的基本方法 | 第20-23页 |
| ·转基因技术的发展前景 | 第23页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第2章 ZmRLK的克隆、载体构建与生物信息学分析 | 第24-47页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·实验药品与试剂 | 第24页 |
| ·实验菌种与载体 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-35页 |
| ·冷处理 | 第26页 |
| ·总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·c DNA的合成 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·目的基因的克隆 | 第29页 |
| ·目的片段回收与连接p MD18-T载体 | 第29-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的提取及分子鉴定 | 第32-34页 |
| ·测序 | 第34页 |
| ·植物表达载体构建 | 第34页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-44页 |
| ·ZmRLK基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌质粒转化农杆菌的鉴定 | 第38-39页 |
| ·生物信息学分析 | 第39-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·抗冷基因ZmRLK | 第44-45页 |
| ·表达载体的构建 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第3章 抗冷基因ZmRLK的功能验证 | 第47-61页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌种与载体 | 第47页 |
| ·实验药品及仪器 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-53页 |
| ·农杆菌侵染法转化拟南芥 | 第48-49页 |
| ·转化植株抗性筛选 | 第49页 |
| ·转基因植株的检测 | 第49-51页 |
| ·冷胁迫处理 | 第51页 |
| ·生理生化指标的测定 | 第51-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-59页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第53页 |
| ·转基因拟南芥植株的分子鉴定 | 第53-56页 |
| ·冷处理 | 第56-57页 |
| ·生理生化指标的测定 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·抗冷相关的生理生化指标 | 第59-60页 |
| ·拟南芥的种子萌发 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第4章 ZmRLK基因对玉米的遗传转化 | 第61-82页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·受体材料 | 第61页 |
| ·菌株和植物表达载体 | 第61页 |
| ·实验试剂、药品和仪器 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-66页 |
| ·幼胚的获得 | 第62页 |
| ·体细胞胚胎的诱导 | 第62页 |
| ·农杆菌侵染玉米幼胚 | 第62-63页 |
| ·遗传转化体系的优化 | 第63-64页 |
| ·农杆菌侵染玉米体细胞胚胎 | 第64页 |
| ·DNA提取 | 第64页 |
| ·分子检测 | 第64页 |
| ·荧光定量检测 | 第64-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-80页 |
| ·遗传转化体系的优化 | 第66-71页 |
| ·农杆菌介导的玉米遗传转化 | 第71-76页 |
| ·DNA提取 | 第76页 |
| ·PCR检测 | 第76-79页 |
| ·荧光定量PCR | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 第5章 花粉管通道法转化玉米的研究 | 第82-90页 |
| ·实验材料 | 第82页 |
| ·受体材料 | 第82页 |
| ·菌株和植物表达载体 | 第82页 |
| ·实验试剂、药品及仪器 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-84页 |
| ·重组质粒DNA的制备 | 第82-83页 |
| ·重组质粒DNA的导入 | 第83-84页 |
| ·T0代转化植株的Basta抗性筛选 | 第84页 |
| ·T0代转化植株分子检测 | 第84页 |
| ·结果与分析 | 第84-89页 |
| ·重组质粒DNA的分子鉴定 | 第84-85页 |
| ·T0代转化植株的Basta抗性筛选 | 第85-86页 |
| ·T0代转化植株的PCR分子检测 | 第86-88页 |
| ·转基因种子的获得 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第6章 全文结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 作者简介 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |