基于细胞表面展示—解离系统的纤维素酶定向进化
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-25页 |
| ·纤维素 | 第10页 |
| ·纤维素酶 | 第10-11页 |
| ·细胞表面展示-释放系统 | 第11-18页 |
| ·细胞表面展示系统 | 第11-15页 |
| ·蛋白内含子简介 | 第15-16页 |
| ·蛋白内含子剪切机制 | 第16-17页 |
| ·蛋白内含子的应用 | 第17-18页 |
| ·酶的定向进化 | 第18-24页 |
| ·酶的定向进化介绍 | 第18-19页 |
| ·酶的定向进化过程 | 第19页 |
| ·突变体库的构建 | 第19-22页 |
| ·突变体库的筛选 | 第22-24页 |
| ·立题依据和研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 实验材料 | 第25-31页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及配制 | 第26-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| 第3章 CPCEL5A突变体文库的构建与筛选 | 第31-42页 |
| ·突变体文库构建 | 第31-34页 |
| ·CpCel 5A易错PCR | 第31页 |
| ·DNA多聚体的构建POE-PCR | 第31-32页 |
| ·DNA多聚体的酶切 | 第32-33页 |
| ·DNA多聚体的酶切后连接反应 | 第33页 |
| ·感受态细胞的制备和转化 | 第33-34页 |
| ·突变体文库的保存 | 第34页 |
| ·突变体文库的筛选 | 第34-36页 |
| ·突变体文库的培养 | 第34页 |
| ·Ic蛋白的表达与粗酶液制备 | 第34页 |
| ·刚果红平板筛选 | 第34页 |
| ·细胞表面展示纤维素酶的释放 | 第34-35页 |
| ·突变体的原位酶活力测定 | 第35页 |
| ·质粒及PCR验证筛选突变体 | 第35-36页 |
| ·双酶切和测序验证 | 第36页 |
| ·实验结果与讨论 | 第36-41页 |
| ·CpCel 5A易错PCR与DNA多聚体 | 第36-37页 |
| ·突变体的大量培养 | 第37-38页 |
| ·刚果红平板筛选 | 第38页 |
| ·纤维素酶活力的二次筛选 | 第38-39页 |
| ·质粒及PCR验证筛选突变体 | 第39-40页 |
| ·测序验证 | 第40-41页 |
| 小结 | 第41-42页 |
| 第4章 突变体的重组与表达 | 第42-56页 |
| ·突变体的构建 | 第42-43页 |
| ·扩增目的基因 | 第42-43页 |
| ·重组突变体的验证和转化 | 第43页 |
| ·重组纤维素酶的表达、纯化和性质研究 | 第43-44页 |
| ·粗酶液的制备 | 第43-44页 |
| ·亲和柱层析 | 第44页 |
| ·突变体酶活力的测定 | 第44-46页 |
| ·酶比活力及最适pH测定 | 第44-46页 |
| ·突变体酶水解进程的测定 | 第46页 |
| ·蛋白序列的同源建模 | 第46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-55页 |
| ·突变体基因的克隆与构建 | 第46-47页 |
| ·内切纤维素酶的表达和纯化 | 第47-49页 |
| ·比活力和最适pH测定 | 第49-50页 |
| ·突变体酶水解进程的测定 | 第50-52页 |
| ·CpCel5A的同源建模 | 第52-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 作者简介和科研成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
