| 摘要 | 第1-8页 |
| 中英文缩略词 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-17页 |
| 1. 副结核病的概述 | 第9-12页 |
| ·病原学 | 第9-10页 |
| ·流行病学特征 | 第10页 |
| ·易感动物 | 第10页 |
| ·传染源 | 第10页 |
| ·传播途径 | 第10页 |
| ·疾病学与生物学特征 | 第10-11页 |
| ·临床症状 | 第10-11页 |
| ·病理变化 | 第11页 |
| ·发病机理 | 第11-12页 |
| 2. 副结核病诊断技术的研究进展 | 第12-15页 |
| ·细菌学诊断 | 第12-13页 |
| ·涂片镜检法和细菌培养法 | 第12页 |
| ·变态反应 | 第12-13页 |
| ·免疫学诊断 | 第13-14页 |
| ·血清学检查 | 第13页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第13-14页 |
| ·分子生物学诊断 | 第14-15页 |
| 3. PMA用于活菌检测的机理及研究现状 | 第15页 |
| ·PMA用于活菌检测的机理 | 第15页 |
| ·PMA-qPCR技术的研究现状 | 第15页 |
| 4. 研究的目的及意义 | 第15-17页 |
| 实验一 副结核分枝杆菌标准菌株TaqMan荧光定量PCR方法的建立 | 第17-34页 |
| 1. 材料与方法 | 第17-19页 |
| ·菌株 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| 2. 试验方法 | 第19-23页 |
| ·副结核标准菌株(P10和P18)的复苏与培养 | 第19-20页 |
| ·副结核分枝杆菌标准菌株的萋-尼氏抗酸染色 | 第20页 |
| ·引物和探针的设计与合成 | 第20页 |
| ·副结核分枝杆菌标准菌株(P10和P18)DNA的制备 | 第20-21页 |
| ·阳性质粒的克隆 | 第21-22页 |
| ·目的片段的PCR扩增及回收 | 第21页 |
| ·目的片段的连接及链接物的转化 | 第21页 |
| ·质粒的提取 | 第21-22页 |
| ·阳性质粒的鉴定 | 第22页 |
| ·标准曲线的制作 | 第22页 |
| ·TaqMan荧光定量PCR反应体系及循环条件 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| ·特异性试验 | 第23页 |
| ·敏感性试验 | 第23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-31页 |
| ·液体培养基的培养结果 | 第23-25页 |
| ·固体培养基的培养结果 | 第25-27页 |
| ·萋-尼抗酸染色结果 | 第27页 |
| ·阳性质粒的鉴定结果 | 第27-28页 |
| ·TaqMan PCR荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第28页 |
| ·副结核标准菌株TaqMan荧光定量PCR反应结果 | 第28-29页 |
| ·TaqMan荧光定量PCR电泳结果 | 第29-30页 |
| ·特异性试验 | 第30页 |
| ·敏感性试验 | 第30-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-34页 |
| ·菌种的复苏与培养 | 第31-32页 |
| ·TaqMan荧光定量PCR方法的建立 | 第32-34页 |
| 实验二 应用TaqMan荧光定量PCR法对奶及奶制品中的副结核分枝杆菌存活状态的快速判定 | 第34-47页 |
| 1. 材料与方法 | 第34-36页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·奶及奶制品样本 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| 2. 试验方法 | 第36-38页 |
| ·菌体培养 | 第36页 |
| ·对常规奶及奶制品的TaqMan荧光定量PCR检测 | 第36页 |
| ·PMA作用Map标准菌株最佳反应条件的优化 | 第36-37页 |
| ·Map标准菌株(P10和P18)膜损伤菌的制备 | 第36页 |
| ·PMA对Map标准菌株(P10和P18)的处理 | 第36页 |
| ·PMA质量浓度的优化 | 第36-37页 |
| ·PMA光照处理时间的优化 | 第37页 |
| ·最佳PMA反应条件下奶及奶制品中活菌的定量检测 | 第37页 |
| ·人工污染Map奶样中(P10和P18)膜损伤菌的制备 | 第37页 |
| ·PMA对人工污染Map奶样中(P10和P18)膜损伤菌的处理 | 第37页 |
| ·副结核标准菌株DNA模板的提取 | 第37-38页 |
| ·TaqMan荧光定量PCR反应体系及循环条件 | 第38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
| 3. 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·对常规奶及奶制品的TaqMan荧光定量PCR检测结果 | 第38-39页 |
| ·常规奶及奶制品中TaqMan荧光定量PCR电泳结果 | 第39页 |
| ·光照处理时间的优化 | 第39-40页 |
| ·PMA质量浓度的优化 | 第40-41页 |
| ·PMA作用Map标准菌株(P10和P18)后的TaqMan PCR结果 | 第41-42页 |
| ·PMA作用Map标准菌株后TaqMan荧光定量PCR电泳结果 | 第42页 |
| ·PMA与荧光定量PCR法检测出的阳性奶及奶制品中Map死菌DNA作用后的TaqMan PCR扩增结果 | 第42-44页 |
| ·PMA与荧光定量PCR法检测出的阳性奶及奶制品中Map死菌DNA作用后的电泳结果 | 第44-45页 |
| 4. 讨论 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-59页 |
| Abstract | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
