| 摘要 | 第1-9页 |
| 文献综述 | 第9-16页 |
| 1 果胶和果胶酶 | 第9-12页 |
| ·果胶 | 第9页 |
| ·果胶酶 | 第9-10页 |
| ·果胶酶产生的菌株 | 第10-12页 |
| 2 碱性果胶酶的应用 | 第12-13页 |
| ·医药原料的提取 | 第12页 |
| ·对植物韧皮纤维的脱胶 | 第12页 |
| ·棉花的精炼 | 第12-13页 |
| ·处理含有果胶的污水 | 第13页 |
| ·造纸业的应用 | 第13页 |
| ·榨油 | 第13页 |
| ·咖啡和茶的发酵 | 第13页 |
| 3 枸杞多糖的提取 | 第13-14页 |
| 4 碱性果胶酶研究的意义 | 第14-15页 |
| 5 实验设计 | 第15-16页 |
| 实验材料和方法 | 第16-33页 |
| 1 实验材料 | 第16-19页 |
| ·菌株 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·相关材料、试剂和仪器 | 第16-17页 |
| ·DNA电泳试剂 | 第17-18页 |
| ·蛋白电泳试剂 | 第18页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第18页 |
| ·DNS试剂的制备 | 第18页 |
| ·pel基因序列及相关引物序列 | 第18-19页 |
| ·序列比对 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-33页 |
| ·基础实验方法和原理 | 第19-27页 |
| ·短小芽孢杆菌基因组的提取 | 第19-20页 |
| ·DNA胶回收和质粒的提取 | 第20页 |
| ·DNA浓度的测定 | 第20页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第20-21页 |
| ·电转化 | 第21页 |
| ·pET28a-pel的构建 | 第21-22页 |
| ·菌落PCR检测 | 第22-23页 |
| ·Megawhop PCR | 第23-24页 |
| ·半乳糖醛酸含量的测定和标准曲线 | 第24-25页 |
| ·蛋白浓度的测定和标准曲线 | 第25-26页 |
| ·苯酚-硫酸法测定多糖浓度和多糖标准曲线 | 第26-27页 |
| ·粗酶液的制取 | 第27页 |
| ·蛋白的纯化 | 第27页 |
| ·DNA文库的构建 | 第27-29页 |
| ·定点突变和定点饱突变库的构建 | 第27-28页 |
| ·随机突变库的构建 | 第28-29页 |
| ·筛选方法 | 第29-31页 |
| ·初筛方法 | 第29-30页 |
| ·复筛方法 | 第30-31页 |
| ·酶活力的测定 | 第31页 |
| ·热稳定性的测定 | 第31页 |
| ·酶动力学参数的测定 | 第31-32页 |
| ·拘杞多糖的提取和多糖浓度的计算 | 第32-33页 |
| 实验结果与分析 | 第33-41页 |
| 1 pET28a-pel重组质粒的构建 | 第33页 |
| 2 定点突变和定点饱和突变库的筛选 | 第33-35页 |
| 3 随机突变库的筛选 | 第35-36页 |
| 4 组合突变 | 第36页 |
| 5 突变体性质比较 | 第36-39页 |
| 6 突变体应用于提取枸杞多糖 | 第39-41页 |
| 讨论 | 第41-47页 |
| 1 突变体活性和热稳定性的提高 | 第41-43页 |
| ·序列对比分析 | 第41-42页 |
| ·突变位点分析 | 第42-43页 |
| 2 重组载体的构建和表达的优化 | 第43-44页 |
| 3 突变技术 | 第44页 |
| 3 果胶酶在医药方面的应用 | 第44-45页 |
| 4 应用展望 | 第45-47页 |
| 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| Abstract | 第53-55页 |
| 附录1 野生型碱性果胶酶全基因组序列 | 第55-56页 |
| 附录2 pET28a-pel的质粒图谱 | 第56-57页 |
| 附录3 野生型碱性果胶酶和突变体与原始序列测序比对 | 第57-58页 |
| 附录4 六个定点突变体与原始序列测序比对 | 第58-59页 |
| 研究生期间发表文章 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |