| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1.前言 | 第11-17页 |
| ·猪链球菌2型(SS2)的研究进展 | 第11-12页 |
| ·猪链球菌2型的病原学及流行病学特征 | 第11页 |
| ·猪链球菌2型毒力因子的研究进展 | 第11-12页 |
| ·双组份调控系统的研究 | 第12-13页 |
| ·双组份调控系统CiaRH的研究 | 第12页 |
| ·CiaR调控的启动子中的csRNAs | 第12-13页 |
| ·CiaRH的调控机制 | 第13页 |
| ·CiaRH对病原菌的毒力的作用 | 第13页 |
| ·CiaRH对生物被膜的影响 | 第13页 |
| ·细菌生物被膜的研究进展 | 第13-15页 |
| ·病原菌生物被膜生成的相关影响因素 | 第14页 |
| ·病原菌生物被膜与毒力的关系 | 第14页 |
| ·病原菌生物被膜的致病机制 | 第14-15页 |
| ·SSU05_2039和SSU05_2036基因功能的研究进展 | 第15-17页 |
| ·SSU05_2039基因功能研究 | 第15页 |
| ·SSU05_2036基因功能研究 | 第15-17页 |
| 2.研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 3.材料与方法 | 第18-33页 |
| ·材料 | 第18-25页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第18-21页 |
| ·动物和细胞 | 第21页 |
| ·主要药品、试剂、试剂盒与仪器 | 第21-22页 |
| ·主要培养基及抗生素配制 | 第22页 |
| ·主要溶液配制 | 第22-24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-33页 |
| ·RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·反转录PCR | 第26页 |
| ·实时荧光定量PCR(Real-time PCR) | 第26-27页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第27页 |
| ·蛋白质的鉴定(SDS-PAGE) | 第27-28页 |
| ·蛋白纯化 | 第28页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第28页 |
| ·电泳迁移率实验(EMSA) | 第28-29页 |
| ·猪链球菌2型的电转化 | 第29页 |
| ·突变株的筛选与鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第29页 |
| ·突变株的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| ·突变株△CiaRH的鉴定 | 第30页 |
| ·突变株生物学特性的研究 | 第30页 |
| ·生长曲线的测定 | 第30页 |
| ·溶血活性的比较 | 第30页 |
| ·96孔板结晶紫染色法 | 第30-31页 |
| ·小鼠的半数致死量(LD_(50))实验(寇氏(Korbor)法) | 第31页 |
| ·小鼠组织载菌量的测定 | 第31页 |
| ·吞噬实验(小鼠巨噬细胞RAW264.7) | 第31-33页 |
| 4.实验结果与分析 | 第33-46页 |
| ·突变株△CiaRH的鉴定及调控基因的筛选 | 第33-36页 |
| ·突变株△CiaRH的验证 | 第33-34页 |
| ·表达谱芯片筛选调控基因及SSU05_2036基因的重新命名 | 第34页 |
| ·凝胶电泳迁移率(EMSA)体外结合试验结果分析 | 第34-35页 |
| ·荧光定量验证(Real-Time PCR) | 第35-36页 |
| ·突变株△SSU05_2039和△SSU05_2036的重组质粒构建及筛选 | 第36-40页 |
| ·△SSU05_2039和△SSU05_2036的重组质粒构建 | 第36-38页 |
| ·突变株△SSU05_2039和△SSU05_2036的筛选与鉴定 | 第38-40页 |
| ·突变株△SSU05_2036和△SSU05_2039的生物学特性研究 | 第40-41页 |
| ·生长曲线的测定 | 第40页 |
| ·溶血活性测定 | 第40-41页 |
| ·生物被膜结果分析 | 第41-42页 |
| ·突变株△SSU05_2036和△SSU05_2039对小鼠致病力的影响 | 第42-45页 |
| ·小鼠LD_(50)(半数致死量)的测定 | 第42-43页 |
| ·组织载菌量的结果分析 | 第43-45页 |
| ·吞噬实验结果分析 | 第45-46页 |
| 5.讨论 | 第46-48页 |
| ·突变株的构建 | 第46页 |
| ·CiaRH的调控基因SSU05_2036和SSU05_2039对生物被膜的影响可能的机制 | 第46-47页 |
| ·吞噬试验结果讨论 | 第47页 |
| ·CiaRH调控基因SSU05_2036和SSU05_2039的后续研究展望 | 第47-48页 |
| 6.结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
