| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-20页 |
| 一、标记基因删除的方法 | 第13页 |
| 二、Cre/loxp重组系统的分子机制 | 第13-15页 |
| 三、Cre/loxp系统的应用 | 第15-17页 |
| 参考文献 | 第17-20页 |
| 第二部分 实验研究 | 第20-52页 |
| 第一章 表达载体pDsReD2-1-K14-VEGF-LOXP的构建 | 第20-28页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| ·载体与菌种 | 第21页 |
| ·试剂与耗材 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-24页 |
| ·K14-VEGF-LOXP序列的克隆 | 第21-22页 |
| ·表达载体pDsReD2-1-K14-VEGF-LOXP的构建 | 第22-23页 |
| ·表达载体的PCR和酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·表达载体的线性化 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-27页 |
| ·K14-VEGF-LOXP序列克隆与分析 | 第24-26页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 第二章 绒山羊转基因细胞系的建立及标记基因的删除 | 第28-44页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·活体实验材料 | 第29页 |
| ·菌液 | 第29页 |
| ·试剂耗材 | 第29页 |
| ·溶液配制 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-34页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞分离与培养 | 第30页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞的传代及冻存 | 第30页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞的解冻及复苏 | 第30页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞的性别鉴定 | 第30-31页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞生长曲线的测定 | 第31页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞的转染与筛选 | 第31-32页 |
| ·转基因绒山羊胎儿成纤维细胞的鉴定 | 第32-33页 |
| ·转基因绒山羊成纤维细胞标记基因的删除 | 第33页 |
| ·荧光定量PCR检测标记基因的删除效果 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞的培养 | 第34页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞的性别鉴定 | 第34-35页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞生长曲线的绘制 | 第35页 |
| ·绒山羊胎儿成纤维细胞的转染 | 第35-37页 |
| ·转表达载体绒山羊成纤维细胞的转基因鉴定 | 第37-38页 |
| ·转基因绒山羊成纤维细胞标记基因的删除 | 第38-41页 |
| ·荧光定量PCR检测标记基因的删除效果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 转基因胚胎的制备与转基因绒山羊的生产 | 第44-52页 |
| 1 材料 | 第44-46页 |
| ·实验仪器 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·试剂耗材 | 第45页 |
| ·溶液配制 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-47页 |
| ·卵母细胞体外成熟 | 第46页 |
| ·转基因绒山羊克隆胚胎的制备及发育 | 第46页 |
| ·受体母羊的准备 | 第46页 |
| ·转基因克隆胚胎的移植及产羔 | 第46-47页 |
| ·转基因绒山羊的鉴定 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-50页 |
| ·转基因克隆胚胎的发育 | 第47-48页 |
| ·转基因克隆胚胎的移植及产羔 | 第48-49页 |
| ·转基因绒山羊的鉴定 | 第49-50页 |
| ·转基因绒山羊的解剖 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录1 | 第59-64页 |
| 硕士期间发表论文 | 第64页 |