| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 引言 | 第14-21页 |
| 1 我国水产养殖业的发展 | 第14-15页 |
| 2 抗菌肽作为绿色饲料添加剂的发展前景 | 第15页 |
| 3 抗菌肽的定义及分类 | 第15-16页 |
| 4 抗菌肽的结构 | 第16页 |
| 5 抗菌肽的抑菌机制 | 第16-17页 |
| 6 鱼类抗菌肽的研究进展 | 第17-19页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第一章 斑点叉尾鮰 hepcidin 原前体肽及成熟肽基因的 cDNA 克隆 | 第21-31页 |
| ·材料与方法 | 第21-26页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第21页 |
| ·第一股 cDNA 的合成 | 第21-22页 |
| ·引物的设计 | 第22页 |
| ·PCR 的反应体系和条件 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和割胶纯化 DNA | 第23页 |
| ·目的片段与克隆质粒的连接 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的转化及阳性克隆的筛选 | 第24-25页 |
| ·基因序列的测定 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-29页 |
| ·基于 RT-PCR 的斑点叉尾鮰 hepcidin 原前体肽及成熟肽基因的扩增结果 | 第26页 |
| ·菌落 PCR 鉴定阳性克隆及测序结果 | 第26-27页 |
| ·编码 hepcidin 原前体肽和成熟肽的 cDNA 序列分析 | 第27-28页 |
| ·斑点叉尾鮰与其他生物的 hepcidin 氨基端序列比较 | 第28-29页 |
| ·本章小结 | 第29-31页 |
| 第二章 pET32a-pCH 和 pET32a-mCH 重组表达质粒的构建 | 第31-39页 |
| ·材料与方法 | 第31-35页 |
| ·含 EcoR I 和 Hind III 酶切位点的引物设计 | 第31页 |
| ·含 EcoR I 和 Hind III 酶切位点的原前体肽（pCH）和成熟肽（mCH）基因的克隆和测序 | 第31页 |
| ·双酶切回收 pCH 和 mCH 片段 | 第31-33页 |
| ·pCH 和 mCH 片段与 pET32a 表达质粒的连接 | 第33-34页 |
| ·菌落 PCR 和双酶切鉴定阳性重组表达质粒 | 第34页 |
| ·pET32a-pCH 和 pET32a-mCH 重组表达质粒的纯化 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-38页 |
| ·pCH 和 mCH 的 PCR 扩增结果 | 第35页 |
| ·pCH 和 mCH 的测序结果 | 第35-36页 |
| ·pET32a-pCH 和 pET32a-mCH 重组表达质粒的获得 | 第36-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 pCH 和 mCH 在大肠杆菌中的融合表达及表达产物的纯化 | 第39-48页 |
| ·材料与方法 | 第39-41页 |
| ·重组表达质粒转化 E.coli BL21（DE3）工程菌 | 第39页 |
| ·IPTG 诱导表达 TrxA-pCH 和 TrxA-mCH 融合蛋白 | 第39页 |
| ·阳性工程菌的超声破碎和基于固化金属离子亲和层析（IMAC）的融合蛋白纯化 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的肠激酶处理和 mCH 成熟肽的超滤纯化 | 第40页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE 分析 | 第40页 |
| ·mCH 成熟肽的 MALDI-TOF-TOF 分析 | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-46页 |
| ·TrxA-pCH 和 TrxA-mCH 融合蛋白在 E.coli BL21（DE3）中的诱导表达结果 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白的分离纯化结果 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的酶切处理和 mCH 成熟肽的纯化分离 | 第43-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 第四章 mCH 成熟肽的抑菌活性鉴定 | 第48-50页 |
| ·材料与方法 | 第48页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·琼脂糖弥散法 | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-49页 |
| ·mCH 的抑菌活性鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 两种 hepcidin 成熟肽基因的 cDNA 串联及其真核表达载体的构建 | 第50-57页 |
| ·材料与方法 | 第50-53页 |
| ·基于 SOE-PCR 的“mCH-mTH”cDNA 串联基因的获得 | 第50-51页 |
| ·含 Xho I 和 Xba I 酶切位点的串联基因的克隆和测序 | 第51-52页 |
| ·pGAPZαA-mCH-mTH 重组表达质粒的构建 | 第52页 |
| ·菌落 PCR 和双酶切鉴定阳性重组表达质粒 | 第52-53页 |
| ·重组表达质粒转化毕赤酵母工程菌 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-55页 |
| ·“mCH-mTH”cDNA 串联基因的 PCR 扩增结果 | 第53-54页 |
| ·串联基因的测序结果 | 第54页 |
| ·pGAPZαA-mCH-mTH 酵母表达系统的构建 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-57页 |
| 第六章 结果与展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
