| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-17页 |
| ·RISC 及其功能介绍 | 第12页 |
| ·AGO 蛋白家族及其分类 | 第12-13页 |
| ·AGO 蛋白家族结构特征 | 第12页 |
| ·AGO 蛋白家族分类 | 第12-13页 |
| ·AGO 蛋白家族的功能 | 第13-14页 |
| ·杆状病毒的背景简介 | 第14-15页 |
| ·杆状病毒的结构 | 第14页 |
| ·杆状病毒的生活史 | 第14-15页 |
| ·杆状病毒的研究进展 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒的应用 | 第16-17页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第17-20页 |
| ·实验目的和意义 | 第17页 |
| ·实验内容 | 第17-18页 |
| ·实验流程图 | 第18-20页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第20-26页 |
| ·序列与工具 | 第20页 |
| ·序列 | 第20页 |
| ·工具 | 第20页 |
| ·结果 | 第20-24页 |
| ·BmAGO3 基因的序列分析 | 第20-21页 |
| ·BmAGO3 蛋白的信号肽分析 | 第21-22页 |
| ·疏水性分析 | 第22页 |
| ·跨膜区分析 | 第22-23页 |
| ·BmAGO3 蛋白的亚细胞定位分析 | 第23页 |
| ·BmAGO3 蛋白的二级结构预测 | 第23-24页 |
| ·BmAGO3 蛋白的抗原区分析 | 第24页 |
| ·BmAGO3 蛋白的三级结构预测 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 第四章 KAGO-3 的原核表达及抗体的制备 | 第26-35页 |
| ·材料与试剂配制 | 第26页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·主要试剂的配置 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-31页 |
| ·家蚕组织总 RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·重组质粒 pET-28a(+)-Kago-3 的构建 | 第27-29页 |
| ·Kago-3 蛋白在大肠杆菌中的诱导表达与纯化 | 第29-30页 |
| ·抗体的制备 | 第30页 |
| ·抗体特异性的 Western blotting 鉴定 | 第30页 |
| ·抗体效价的测定（间接 ELISA 法） | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-33页 |
| ·目的片段的扩增 | 第31页 |
| ·重组质粒 pET-28a(+)-(Kago-3)鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达与纯化 | 第32页 |
| ·多克隆抗体的特异性检测 | 第32-33页 |
| ·多克隆抗体的效价测定 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第五章 家蚕 BMAGO3 基因的表达谱分析与 RNA 干扰研究 | 第35-42页 |
| ·材料与试剂 | 第35页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·试剂配制 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·提取家蚕不同阶段和不同组织的总蛋白 | 第35页 |
| ·BmAGO3 在家蚕各发育时期的表达分析 | 第35页 |
| ·BmAGO3 在五龄幼虫各组织中的表达分析 | 第35-36页 |
| ·亚细胞定位 | 第36页 |
| ·RNA 干扰研究 | 第36-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·家蚕 BmAGO3 各发育时期表达分析 | 第38页 |
| ·五龄幼虫各组织中 BmAGO3 的表达分析 | 第38-39页 |
| ·BmAGO3 蛋白的亚细胞定位 | 第39页 |
| ·BmAGO3 基因双链小 RNA（dsRNA）的合成 | 第39-40页 |
| ·BmAGO3 基因 RNAi 的 MTT 检测分析 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第六章 新型重组家蚕杆状病毒的构建 | 第42-64页 |
| ·材料与试剂 | 第42页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·主要试剂配制 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-56页 |
| ·家蚕（BmN）细胞的复苏、培养与冻存 | 第43-45页 |
| ·野生家蚕杆状病毒的扩增 | 第45页 |
| ·野生家蚕杆状病毒基因组的提取 | 第45页 |
| ·重组载体 pFastBac-Dual-gp64EGFP 的构建 | 第45-50页 |
| ·重组质粒 pFastBac-Dual-gp64EGFP-RFPVP39 的构建 | 第50-53页 |
| ·重组 Bacmid-gp64EGFP-RFPVP39 的构建 | 第53-55页 |
| ·重组病毒 vBm-gp64EGFP-RFPVP39 的构建及鉴定 | 第55页 |
| ·重组家蚕杆状病毒感染细胞的实时观察 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-62页 |
| ·gp64 的信号肽（SP）、EGFP 和 gp64 的跨膜区（TM）的扩增 | 第56页 |
| ·gp64 的信号肽（SP）与 EGFP、gp64 的跨膜区（TM）的重叠延伸 | 第56-57页 |
| ·重组质粒 pFastBac-Dual-gp64EGFP 的鉴定 | 第57-58页 |
| ·红色荧光蛋白 RFP 基因和杆状病毒 VP39 基因的扩增 | 第58页 |
| ·红色荧光蛋白 RFP 基因与杆状病毒 VP39 基因的重叠延伸 | 第58-59页 |
| ·重组质粒 pFastBac-Dual-gp64EGFP-RFPVP39 的鉴定 | 第59页 |
| ·重组 Bacmid 的鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组病毒 vBm-gp64EGFP-RFPVP39 鉴定 | 第60页 |
| ·激光共聚焦显微镜下观察细胞内的荧光蛋白表达 | 第60-61页 |
| ·重组家蚕杆状病毒感染家蚕细胞的实时观察 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
