| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 縮略语的中英文对照 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-45页 |
| 第一章 卵泡与卵泡闭锁研究综述 | 第13-35页 |
| 1 卵泡发育与闭锁概述 | 第13-22页 |
| ·卵泡 | 第13-15页 |
| ·卵泡发育 | 第15-19页 |
| ·卵泡闭锁 | 第19-22页 |
| 2 卵泡闭锁调控的研究进展 | 第22-28页 |
| ·生殖激素对卵泡闭锁的调控 | 第23-25页 |
| ·凋亡相关基因对卵泡闭锁的调控 | 第25-26页 |
| ·细胞因子对卵泡闭锁的调控 | 第26-27页 |
| ·调控卵泡闭锁的其他因子 | 第27-28页 |
| 3 研究卵泡闭锁调控的意义 | 第28页 |
| 参考文献 | 第28-35页 |
| 第二章 miRNA及其对细胞凋亡的调控研究综述 | 第35-45页 |
| 1 MIRNA概述 | 第35-39页 |
| ·miRNA的概念 | 第35-36页 |
| ·miRNA的生成与作用机制 | 第36-37页 |
| ·鉴定miRNA靶基因的方法 | 第37-39页 |
| 2 MIRNA调控细胞凋亡的研究进展 | 第39-41页 |
| ·促凋亡作用的miRNA | 第39页 |
| ·抗凋亡作用的miRNA | 第39-41页 |
| 3 MIRNA的其它生物学功能 | 第41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 第二篇 试验部分 | 第45-101页 |
| 第一章 猪卵泡闭锁的特征 | 第45-57页 |
| 1 材料方法 | 第45-48页 |
| ·猪卵泡分离与分类 | 第45-46页 |
| ·卵泡液颗粒细胞密度测定 | 第46页 |
| ·卵泡液孕激素、雌激素含量测定 | 第46页 |
| ·颗粒细胞Hochest 33342染色 | 第46页 |
| ·卵泡石蜡切片的制作 | 第46-47页 |
| ·苏木精、伊红染色 | 第47页 |
| ·数据分析 | 第47-48页 |
| 2 试验结果 | 第48-52页 |
| ·猪卵泡闭锁的总体特征 | 第48-49页 |
| ·猪卵泡闭锁过程中卵泡液内颗粒细胞密度增加 | 第49-50页 |
| ·猪卵泡闭锁过程中卵泡液P/E比值增加 | 第50-51页 |
| ·卵泡液颗粒细胞密度与P/E比值呈显著正相关 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 第二章 猪3～5mm卵泡闭锁过程中凋亡通路分析 | 第57-73页 |
| 1 材料方法 | 第58-62页 |
| ·猪卵泡的分离与分类 | 第58页 |
| ·单个卵泡总RNA提取 | 第58-59页 |
| ·RNA浓度和纯度检测 | 第59页 |
| ·反转录(RT,cDNA第一链的合成) | 第59-60页 |
| ·Real-time RCR | 第60-61页 |
| ·免疫荧光细胞化学 | 第61-62页 |
| ·数据分析 | 第62页 |
| 2 试验结果 | 第62-66页 |
| ·mRNA中DNA污染的检测 | 第62-63页 |
| ·各基因引物扩增效果检测 | 第63页 |
| ·猪3～5mm卵泡闭锁过程中凋亡通路基因的表达 | 第63-64页 |
| ·猪3～5mm卵泡闭锁过程中抗凋亡基因的表达 | 第64页 |
| ·猪3～5mm卵泡闭锁过程中Caspase-8和Fox O1基因的表达 | 第64-65页 |
| ·凋亡通路重要基因在健康组的变异程度分析 | 第65-66页 |
| ·Fox O1与猪颗粒细胞凋亡的关系 | 第66页 |
| 3 讨论 | 第66-69页 |
| ·猪3～5mm卵泡闭锁过程中细胞凋亡的主要通路 | 第66-67页 |
| ·凋亡通路基因表达在健康卵泡组的变异分析 | 第67-68页 |
| ·Fox O1对凋亡通路基因表达的调控 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 第三章 猪卵泡闭锁过程miRNA表达谱的建立与分析 | 第73-87页 |
| 1 材料方法 | 第74-76页 |
| ·猪卵泡的分离与分类 | 第74页 |
| ·μaraflo~(TM) microRNA微阵列基因表达检测 | 第74-75页 |
| ·miRNA靶基因预测 | 第75页 |
| ·miRNA功能预测 | 第75-76页 |
| 2 试验结果 | 第76-80页 |
| ·猪卵泡闭锁过程miRNA表达谱的建立 | 第76页 |
| ·猪卵泡闭锁启动的差异表达miRNA筛选 | 第76-77页 |
| ·差异表达miRNA的靶基因预测结果 | 第77-78页 |
| ·差异表达miRNA的功能分析 | 第78-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-87页 |
| 第四章 miR-26B促进猪颗粒细胞凋亡的机制 | 第87-101页 |
| 1 材料方法 | 第88-91页 |
| ·猪卵巢颗粒细胞的分离与培养 | 第88页 |
| ·miR-26b的转染 | 第88-89页 |
| ·AnnexinV-FITC和PI染色 | 第89页 |
| ·反转录与Real-time RCR | 第89页 |
| ·荧光素酶报告基因载体的构建 | 第89-90页 |
| ·荧光素酶活性分析 | 第90页 |
| ·TUNEL染色 | 第90-91页 |
| ·数据分析 | 第91页 |
| 2 试验结果 | 第91-96页 |
| ·miR-26b在猪卵泡闭锁过程中表达上调 | 第91页 |
| ·miR-26b促进体外培养的猪颗粒细胞凋亡 | 第91-92页 |
| ·miR-26b转染后Fox O1磷酸化水平的变化 | 第92-93页 |
| ·miR-26b过表达降低了ATM基因表达 | 第93-94页 |
| ·荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定 | 第94页 |
| ·ATM是miR-26b直接的靶基因 | 第94-95页 |
| ·miR-26b增加体外培养的猪颗粒细胞的DNA损伤 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-101页 |
| 全文结论 | 第101-103页 |
| 创新 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第107-109页 |
| 附录 | 第109-113页 |
