| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 英文縮略词表 | 第18-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 第一部分 文献综述 | 第21-67页 |
| 第一章 戊型肝炎及其病原分子流行病学研究进展 | 第21-49页 |
| 1 病原学 | 第22页 |
| 2 病毒分类 | 第22-23页 |
| 3 HEV的研究历史 | 第23页 |
| ·人HEV | 第23页 |
| ·猪HEV | 第23页 |
| ·禽HEV | 第23页 |
| 4 HEV基因型及其分布 | 第23-24页 |
| 5 病毒基因组结构和病毒蛋白 | 第24-27页 |
| ·ORF1蛋白 | 第25页 |
| ·ORF2蛋白 | 第25-26页 |
| ·ORF3蛋白 | 第26-27页 |
| 6 流行病学 | 第27-28页 |
| 7 临床症状和病理损伤 | 第28-29页 |
| 8 HEV的复制 | 第29-30页 |
| 9 细胞培养 | 第30-31页 |
| 10 HEV疫苗研究 | 第31-33页 |
| ·原核细胞表达的重组蛋白 | 第31-32页 |
| ·真核细胞系统表达的重组蛋白 | 第32-33页 |
| ·DNA疫苗 | 第33页 |
| 11 预防和控制 | 第33-34页 |
| 12 前景和展望 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-49页 |
| 第二章 RNA病毒的反向遗传学及应用 | 第49-67页 |
| 1 RNA病毒反向遗传学的主要策略 | 第49-52页 |
| ·全长cDNA的装配 | 第50页 |
| ·载体的选择 | 第50-51页 |
| ·RNA聚合酶系统的选择 | 第51-52页 |
| 2 RNA病毒的拯救 | 第52-53页 |
| ·体外转录 | 第52页 |
| ·体内转录 | 第52-53页 |
| 3 RNA病毒拯救后的鉴定 | 第53页 |
| 4 影响感染性的因素 | 第53-55页 |
| ·转录物异质性的影响 | 第54页 |
| ·基因突变的影响 | 第54页 |
| ·末端非病毒序列的影响 | 第54-55页 |
| ·帽子结构的影响 | 第55页 |
| 5 RNA病毒反向遗传学的应用 | 第55-57页 |
| ·RNA病毒基因组结构与功能的研究 | 第55-56页 |
| ·研究新疫苗方面 | 第56-57页 |
| ·RNA病毒载体方面的应用 | 第57页 |
| ·病毒拯救的机制研究 | 第57页 |
| 6 反向遗传学在HEV研究中的应用 | 第57-58页 |
| 7 HEV研究的重要性 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 第二部分 试验研究 | 第67-161页 |
| 第一章 上海地区猪戊型肝炎病毒分子流行病学研究 | 第67-89页 |
| 1 材料与方法 | 第68-76页 |
| ·材料 | 第68-69页 |
| ·方法 | 第69-76页 |
| 2 结果 | 第76-81页 |
| ·RT-nPCR扩增结果 | 第76-77页 |
| ·重组质粒PCR鉴定结果 | 第77页 |
| ·HEV在上海郊区猪场中的流行状况 | 第77-79页 |
| ·不同年龄段猪群感染HEV的状况 | 第79页 |
| ·基因3型和4型HEV的相关性分析 | 第79页 |
| ·遗传进化分析 | 第79-81页 |
| 3 讨论 | 第81-84页 |
| 4 小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 第二章 猪基因3型戊型肝炎病毒上海分离株全基因组序列的测定及遗传进化分析 | 第89-107页 |
| 1 材料与方法 | 第89-96页 |
| ·材料 | 第89-91页 |
| ·方法 | 第91-96页 |
| 2 结果 | 第96-101页 |
| ·RT-nPCR扩增结果 | 第96-97页 |
| ·猪基因3型HEV上海分离株的基因组结构 | 第97页 |
| ·与HEV各基因型代表株的同源性比较 | 第97-99页 |
| ·非编码区及病毒编码蛋白的比较 | 第99-101页 |
| 3 讨论 | 第101-102页 |
| 4 小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-107页 |
| 第三章 重组HEV衣壳蛋白的原核表达、鉴定及多克隆抗体的制备 | 第107-125页 |
| 1 材料与方法 | 第107-117页 |
| ·材料 | 第107-108页 |
| ·方法 | 第108-117页 |
| 2 结果 | 第117-121页 |
| ·目的基因的扩增及克隆 | 第117-118页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-p234的构建及鉴定 | 第118页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第118-119页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第119-120页 |
| ·目的蛋白的Western-Blot | 第120页 |
| ·抗体效价的检测 | 第120-121页 |
| ·目的蛋白的ELISA检测 | 第121页 |
| 3 讨论 | 第121-122页 |
| 4 小结 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-125页 |
| 第四章 猪基因3型HEV上海分离株感染性克隆的构建及体外转录活性的研究 | 第125-151页 |
| 1 材料与方法 | 第125-140页 |
| ·材料 | 第125-127页 |
| ·方法 | 第127-140页 |
| 2 结果 | 第140-146页 |
| ·Overlap PCR、In-fusion PCR及酶连构建基因组全长序列 | 第140-142页 |
| ·亚克隆后重组质粒pGEM 4z-HEV的鉴定 | 第142-143页 |
| ·T7启动子的引入及突变位点的修正 | 第143页 |
| ·pGEM 4z-HEV质粒的酶切鉴定及线性化 | 第143页 |
| ·RNA的转录及变性电泳 | 第143页 |
| ·转录后RNA的RT-nPCR鉴定 | 第143-144页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)检测培养细胞 | 第144-145页 |
| ·转染后细胞裂解物的Western Blot检测 | 第145页 |
| ·转染后细胞的RT-nPCR检测 | 第145-146页 |
| 3 讨论 | 第146-148页 |
| 4 小结 | 第148-149页 |
| 参考文献 | 第149-151页 |
| 第五章 基因3型HEV人工感染SD大鼠的初步研究 | 第151-161页 |
| 1 材料与方法 | 第151-154页 |
| ·材料 | 第151-152页 |
| ·方法 | 第152-154页 |
| 2 结果 | 第154-156页 |
| ·粪便中HEV RNA的检测 | 第154页 |
| ·血清中HEV RNA的检测 | 第154页 |
| ·ELISA检测血清中的抗体 | 第154-155页 |
| ·RT-nPCR检测遗传标志 | 第155-156页 |
| 3 讨论 | 第156-157页 |
| 4 小结 | 第157-158页 |
| 参考文献 | 第158-161页 |
| 全文结论 | 第161-163页 |
| 本文创新点 | 第163-165页 |
| 附录 | 第165-179页 |
| 攻读博士期间发表和完成的论文 | 第179-181页 |
| 致谢 | 第181页 |
