| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第1-5页 |
| 学位论文数据集 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-35页 |
| ·PQQ 结构特点 | 第21页 |
| ·PQQ 的功能 | 第21-23页 |
| ·PQQ 的分布 | 第23页 |
| ·PQQ 的生物合成基因 | 第23-28页 |
| ·PQQ 的生物合成途径 | 第23-24页 |
| ·PQQ 产生菌的基因组成 | 第24-25页 |
| ·PQQ 合成基因同源性的比较 | 第25-26页 |
| ·pqq A | 第26页 |
| ·pqq B | 第26-27页 |
| ·pqq C | 第27页 |
| ·pqqD | 第27-28页 |
| ·pqqE | 第28页 |
| ·pqqF 和 pqqG | 第28页 |
| ·葡萄糖脱氢酶(GDH) | 第28-31页 |
| ·以 PQQ 为辅酶的醌酶 | 第28-29页 |
| ·膜结合葡萄糖脱氢酶(m-GDH) | 第29-30页 |
| ·可溶性葡萄糖脱氢酶(s-GDH) | 第30-31页 |
| ·PQQ 的分泌 | 第31-33页 |
| ·孔蛋白 | 第31-32页 |
| ·信号肽 | 第32-33页 |
| ·PQQ 的检测 | 第33页 |
| ·非酶法检测 | 第33页 |
| ·酶法检测 | 第33页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)法检测 PQQ | 第33页 |
| ·本课题的研究意义 | 第33-35页 |
| 第二章 紫外线-氯化锂诱变选育吡咯喹啉醌高产菌 | 第35-41页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·出发菌株与培养基 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-36页 |
| ·紫外线诱变 | 第35-36页 |
| ·氯化锂诱变 | 第36页 |
| ·紫外线-氯化锂复合诱变 | 第36页 |
| ·筛选与检测 | 第36页 |
| ·结果分析 | 第36-40页 |
| ·紫外线诱变 | 第36-37页 |
| ·氯化锂诱变试验 | 第37-39页 |
| ·紫外线-氯化锂复合诱变 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 吡咯喹啉醌的 HPLC 检测法的确定 | 第41-45页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·不同波长下，标准品出峰对比(流速 0.8 ml/min) | 第41-42页 |
| ·200 nm 波长，不同流速下，标准品出峰对比 | 第42页 |
| ·在选定的最佳条件下，发酵液中 PQQ 出峰与 PQQ 标品出峰比对 | 第42-43页 |
| ·PQQ 标准曲线的绘制 | 第43页 |
| ·本章小结 | 第43-45页 |
| 第四章 孔蛋白与 PQQ 共表达以构建吡咯喹啉醌高产菌 | 第45-63页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌种和质粒 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·工程菌构建 | 第46-51页 |
| ·E. coli BL21 基因组的提取 | 第46页 |
| ·E. coli DH5α感受态的制备 (CaCl2热击法转化) | 第46-47页 |
| ·K. pneumoniae 感受态的制备(电击法转化) | 第47页 |
| ·OmpA、 phoE 基因的扩增 | 第47-48页 |
| ·pET-kan-OmpA、pET-kan-phoE 载体构建 | 第48-49页 |
| ·pET-kan-OmpA、pET-kan-phoE 载体鉴定 | 第49页 |
| ·氯霉素基因(Cm)的扩增 | 第49-50页 |
| ·pET-kan-OmpA-Cm、pET-kan-phoE-Cm 载体的构建 | 第50页 |
| ·pET-kan-OmpA、pET-kan-phoE 工程菌及双质粒工程菌的构建 | 第50-51页 |
| ·工程菌的发酵 | 第51-52页 |
| ·双质粒共存的稳定性 | 第51页 |
| ·发酵方法 | 第51页 |
| ·生物量及 PQQ 产量的测定 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-62页 |
| ·E. coli BL21 基因组的提取 | 第52页 |
| ·OmpA、phoE 基因片段的扩增 | 第52-53页 |
| ·pET-kan-OmpA、pET-kan-phoE 载体的鉴定 | 第53-55页 |
| ·Cm 基因片段的扩增 | 第55页 |
| ·pET-kan-OmpA-Cm、pET-kan-phoE-Cm 载体的鉴定 | 第55-57页 |
| ·pET-kan-OmpA、pET-kan-phoE 工程菌的构建 | 第57页 |
| ·双质粒工程菌的构建 | 第57-59页 |
| ·双质粒共存的稳定性 | 第59-60页 |
| ·重组菌 K. p (pET-kan-phoE)，K. p (pET-kan-ompA)发酵 | 第60-61页 |
| ·双质粒工程菌的发酵 | 第61-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 信号肽基因的克隆及表达以构建吡咯喹啉醌高产菌 | 第63-71页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·菌种和质粒 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-66页 |
| ·pelb 的扩增 | 第64页 |
| ·pET-pelb-pqq 载体的构建 | 第64-65页 |
| ·pET-pelb-pqq 载体的鉴定 | 第65页 |
| ·E. coli BL21(pET-pelb-pqq)工程菌的构建 | 第65页 |
| ·E. coli BL21(pET-pelb-pqq)工程菌的发酵 | 第65-66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-69页 |
| ·pelb 基因片段的扩增 | 第66页 |
| ·载体 pET-pelb-pqq 的鉴定 | 第66-67页 |
| ·E. coli BL21 (pET-pelb-pqq)工程菌的构建 | 第67页 |
| ·E. coli BL21 (pET-pelb-pqq)工程菌的发酵 | 第67-69页 |
| ·本章小结 | 第69-71页 |
| 第六章 葡萄糖脱氢酶与 PQQ 共表达以构建吡咯喹啉醌高产菌 | 第71-81页 |
| ·引言 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·菌种和质粒 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71-72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-74页 |
| ·双质粒工程菌的构建 | 第72页 |
| ·pET-28a-pqq 和 pET-22b-gcd 共表达 | 第72-73页 |
| ·双质粒共存的稳定性 | 第73页 |
| ·PQQ 产量的测定 | 第73页 |
| ·双质粒工程菌发酵条件优化 | 第73-74页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-80页 |
| ·pET-28a-pqq 的鉴定 | 第74-75页 |
| ·pET-22b-gcd 的鉴定 | 第75页 |
| ·工程菌的表达 | 第75-76页 |
| ·发酵条件优化 | 第76页 |
| ·双质粒共存的稳定性 | 第76-77页 |
| ·工程菌的发酵 | 第77-79页 |
| ·葡萄糖浓度测定 | 第79-80页 |
| ·本章小结 | 第80-81页 |
| 第七章 总结与建议 | 第81-84页 |
| ·结论 | 第81-82页 |
| ·创新点 | 第82-83页 |
| ·问题与建议 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 附录1 试剂 | 第89-90页 |
| 附录2 仪器设备 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第92-93页 |
| 作者和导师简介 | 第93页 |
