| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 一、拟南芥EFR蛋白重组表达、纯化及晶体生长 | 第12-49页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| ·拟南芥EFR蛋白 | 第12-16页 |
| ·植物先天免疫系统简介 | 第13-14页 |
| ·植物与病原微生物协同进化 | 第14-15页 |
| ·拟南芥EFR蛋白 | 第15-16页 |
| ·结构分子生物学 | 第16-20页 |
| ·蛋白质晶体学 | 第16-17页 |
| ·蛋白质纯化 | 第17-18页 |
| ·蛋白质结晶方法 | 第18-19页 |
| ·蛋白质晶体学在结构生物学上应用 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-30页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌株及质粒 | 第20页 |
| ·实验主要试剂配方 | 第20-21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-30页 |
| ·拟南芥EFR蛋白生物信息学分析 | 第23-24页 |
| ·拟南芥EFR基因的克隆及鉴定 | 第24-26页 |
| ·EFR(681-1019)-His-TEV-pET28a重组体点突变 | 第26-27页 |
| ·拟南芥EFR蛋白表达纯化 | 第27-29页 |
| ·EFR蛋白晶体筛选 | 第29页 |
| ·EFR蛋白晶体验证及晶体优化 | 第29-30页 |
| 第三章 实验结果 | 第30-40页 |
| ·EFR蛋白生物信息学分析结果 | 第30-33页 |
| ·蛋白基本理化性质分析结果 | 第30页 |
| ·EFR蛋白同源对比分析结果 | 第30-31页 |
| ·保守功能域分析结果 | 第31-32页 |
| ·二级结构预测结果 | 第32-33页 |
| ·EFR目的基因的克隆与鉴定 | 第33-34页 |
| ·EFR蛋白表达和纯化 | 第34-37页 |
| ·EFR蛋白不同克隆表达结果 | 第34-35页 |
| ·EFR(675-1031)与EFR(681-1019)蛋白表达与层析纯化结果 | 第35-37页 |
| ·拟南芥EFR蛋白晶体生长结果 | 第37-40页 |
| 第四章 讨论 | 第40-43页 |
| ·拟南芥EFR目的基因功能片段的确定 | 第40页 |
| ·分子克隆表达载体的选择 | 第40-41页 |
| ·拟南芥EFR(681-1019)蛋白点突变 | 第41页 |
| ·拟南芥EFR蛋白的原核表达 | 第41-42页 |
| ·拟南芥EFR蛋白纯化 | 第42页 |
| ·拟南芥EFR蛋白的晶体筛选和优化 | 第42-43页 |
| 第五章 结论 | 第43-44页 |
| 第六章 展望 | 第44-45页 |
| 第七章 参考文献 | 第45-49页 |
| 二、黑腹果蝇SCOT蛋白重组表达、纯化、初步晶体学研究及酶活测定 | 第49-65页 |
| 第一章 引言 | 第49-51页 |
| 1. 黑腹果蝇琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT) | 第49-51页 |
| ·酮酸中毒 | 第49页 |
| ·乒乓机制 | 第49-51页 |
| 第二章 材料与方法 | 第51-55页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·菌株及质粒 | 第51页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-55页 |
| ·琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT)蛋白表达纯化 | 第51-52页 |
| ·琥珀酰辅酶A转移酶(SCOT)蛋白晶体筛选与酶活测定 | 第52-55页 |
| 第三章 实验结果 | 第55-59页 |
| ·黑腹果蝇SCOT蛋白表达纯化 | 第55-57页 |
| ·黑腹果蝇SCOT蛋白晶体生长及酶活的测定 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-62页 |
| ·黑腹果蝇SCOT蛋白与其它物种中同源蛋白的序列比对 | 第59-60页 |
| ·黑腹果蝇SCOT蛋白晶体结构 | 第60-61页 |
| ·黑腹果蝇SCOT蛋白酶活测定 | 第61-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 第六章 展望 | 第63-64页 |
| 第七章 参考文献 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
