| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-20页 |
| 1 达托霉素结构 | 第12-13页 |
| 2 达托霉素的作用机制 | 第13-14页 |
| 3 达托霉素的合成 | 第14-16页 |
| ·微生物发酵 | 第14页 |
| ·达托霉素化学合成 | 第14-15页 |
| ·达托霉素生物合成 | 第15-16页 |
| 4 玫瑰孢链霉菌的诱变育种 | 第16-17页 |
| 5 文库构建 | 第17-18页 |
| ·文库构建的发展 | 第17-18页 |
| ·细菌人工染色体 | 第18页 |
| ·BAC文库的应用 | 第18页 |
| 6 抗生素的异源表达 | 第18-20页 |
| 第2章 玫瑰孢链霉菌基因组BAC文库构建 | 第20-35页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌种及载体 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要培养基及缓冲液配制 | 第20-21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-28页 |
| ·玫瑰孢链霉菌培养条件 | 第22页 |
| ·包埋块的制备 | 第22-23页 |
| ·内切酶种类及浓度的选择 | 第23-24页 |
| ·高分子量的全基因组DNA酶切与回收 | 第24页 |
| ·载体制备 | 第24-26页 |
| ·DNA大片段与pESPBAC载体连接 | 第26页 |
| ·电转化感受态制备 | 第26-27页 |
| ·电转化 | 第27页 |
| ·插入片段大小检测 | 第27-28页 |
| ·文库保存及混合池构建 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-33页 |
| ·包埋块的制备 | 第28页 |
| ·最佳酶切浓度的确定 | 第28-29页 |
| ·载体制备及其酶切 | 第29-30页 |
| ·包埋块的大量酶切以及高分子量DNA的回收 | 第30-31页 |
| ·连接、除盐及转化 | 第31-32页 |
| ·插入片段大小检测及其文库构建 | 第32-33页 |
| 4 小结 | 第33页 |
| 5 讨论 | 第33-35页 |
| 第3章 达托霉素合成基因簇筛选及其异源表达 | 第35-50页 |
| 1 实验材料 | 第35-37页 |
| ·菌种 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要培养基配制 | 第35-36页 |
| ·实验仪器 | 第36-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-42页 |
| ·基因组提取 | 第37-38页 |
| ·含有完整达托霉素合成基因簇克隆的筛选 | 第38-39页 |
| ·阳性质粒电转化E.coil ET12567(pUZ8002) | 第39页 |
| ·接合转移实验及阳性接合子的初筛 | 第39-40页 |
| ·阳性接合子的再次筛选 | 第40页 |
| ·阳性接合子(变铅青链霉菌TK24)的发酵培养 | 第40页 |
| ·达托霉素纯化 | 第40-41页 |
| ·生物检测方法 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-48页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第42-45页 |
| ·接合转移 | 第45-46页 |
| ·阳性接合子的鉴定 | 第46页 |
| ·达托霉素标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| ·发酵液中达托霉素的纯化及检测 | 第47-48页 |
| 4 小结 | 第48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| 第4章 达托霉素生产菌(ATCC 31568)的紫外诱变和抗生素抗性筛选 | 第50-59页 |
| 1 实验材料 | 第50-52页 |
| ·菌种 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·主要培养基及缓冲液配制 | 第51页 |
| ·实验仪器 | 第51-52页 |
| 2 实验方法 | 第52-53页 |
| ·培养条件 | 第52页 |
| ·生物检测方法 | 第52页 |
| ·紫外诱变条件的确定 | 第52页 |
| ·抗生素MIC值的确定 | 第52页 |
| ·抗生素抗性突变株的分离 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| ·最佳紫外诱变时间的确定 | 第53-54页 |
| ·抗性筛选浓度的确定 | 第54页 |
| ·紫外诱变筛选结果 | 第54页 |
| ·紫外诱变结合抗生素抗性筛选结果 | 第54-55页 |
| ·高产突变株遗传稳定性考察 | 第55-57页 |
| ·抑菌活性定性实验 | 第57页 |
| 4 小结 | 第57页 |
| 5 讨论 | 第57-59页 |
| 第5章 达托霉素生物合成调控机制初步研究 | 第59-67页 |
| 1 实验材料 | 第59-60页 |
| ·菌种 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·主要培养基及缓冲液配制 | 第60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-63页 |
| ·培养条件 | 第60页 |
| ·总RNA提取 | 第60-61页 |
| ·反转录 | 第61页 |
| ·实时定量PCR(qPCR) | 第61-63页 |
| 3 实验结果 | 第63-66页 |
| ·引物验证 | 第63-64页 |
| ·实时定量PCR | 第64-66页 |
| 4 结果讨论 | 第66-67页 |
| 总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文、专利及参加的会议 | 第76页 |