| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| ·腈水合酶的概述 | 第9-11页 |
| ·腈水合酶的来源与分布 | 第9页 |
| ·腈水合酶的性质 | 第9-10页 |
| ·腈水合酶的结构与分类 | 第10-11页 |
| ·腈水合酶的工业应用 | 第11页 |
| ·腈水合酶的研究进展 | 第11-15页 |
| ·腈水合酶的结构解析 | 第11-12页 |
| ·腈水合酶的催化及合成机理研究 | 第12-15页 |
| ·腈水合酶的异源表达 | 第15页 |
| ·本课题的研究研究背景、意义和主要研究内容 | 第15-16页 |
| ·本课题研究思路 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第18-27页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·实验菌株与载体 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·实验相关溶液配制 | 第19页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-27页 |
| ·L-NHase 在 E. coli BL21(DE3)中过量表达的策略 | 第20-23页 |
| ·L-NHase 及调控蛋白 NhlE 的纯化及性质研究 | 第23-24页 |
| ·L-NHase 中α亚基上功能位点的研究 | 第24-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-51页 |
| ·L-NHase 在大肠杆菌 BL21(DE3)中的表达策略 | 第27-32页 |
| ·pET24a-nhlBAE 载体的构建与表达 | 第27页 |
| ·nhlBAE 基因改造及蛋白质表达 | 第27-29页 |
| ·BL21(DE3)/pET24a-nhlBrbsArbsE 诱导表达条件优化 | 第29-32页 |
| ·L-NHase 及 NhlE 的纯化方法的建立 | 第32-37页 |
| ·带 Strep 标签的载体构建及粗酶液比活力测定 | 第32-35页 |
| ·L-NHase 及 NhlE 的纯化 | 第35-37页 |
| ·L-NHase 中α亚基上功能位点的研究 | 第37-51页 |
| ·L-NHase 中α亚基上突变位点的选择 | 第37-39页 |
| ·突变菌株的构建 | 第39-40页 |
| ·突变菌株的比活力测定 | 第40页 |
| ·αY115A 突变体的机制研究 | 第40-44页 |
| ·L-NHase 中其他突变位点的机制初步探究 | 第44-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51页 |
| 展望 | 第51-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 附录 | 第57页 |
