| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·概述 | 第7-11页 |
| ·肝素和硫酸乙酰肝素 | 第7页 |
| ·肝素和硫酸乙酰肝素的生物学功能 | 第7-8页 |
| ·肝素和硫酸乙酰肝素的合成方法 | 第8-10页 |
| ·肝素前体的性质 | 第10页 |
| ·肝素前体的发酵研究 | 第10-11页 |
| ·补料分批发酵 | 第11页 |
| ·国内外研究进展 | 第11-12页 |
| ·立题依据 | 第12页 |
| ·主要研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第13-14页 |
| ·试剂与仪器 | 第14-15页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·DNA 操作 | 第15-20页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第15页 |
| ·PCR 操作 | 第15-16页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第16-17页 |
| ·质粒小量抽提 | 第17页 |
| ·双酶切反应及 DNA 回收 | 第17-19页 |
| ·载体的连接 | 第19页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第19页 |
| ·DNA 化学转化大肠杆菌 | 第19-20页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第20页 |
| ·重组菌的培养与诱导表达 | 第20页 |
| ·分析方法 | 第20-24页 |
| ·菌体浓度测定 | 第20页 |
| ·菌体干重的测定 | 第20-21页 |
| ·甘油含量的测定 | 第21页 |
| ·肝素前体含量的测定 | 第21-22页 |
| ·基于 SDS-PAGE 的蛋白表达分析 | 第22页 |
| ·质粒稳定性验证 | 第22页 |
| ·肝素前体的纯化 | 第22-23页 |
| ·肝素前体的分子量测定 | 第23页 |
| ·肝素前体的结构分析 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-50页 |
| ·大肠杆菌 K5 KfiA-D 基因在大肠杆菌 BL21 中的表达 | 第24-33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第26-29页 |
| ·重组菌的获得及基因功能分析 | 第29-31页 |
| ·重组 sAC 和 sABCD 的蛋白表达 SDS-PAGE 分析 | 第31-32页 |
| ·质粒稳定性验证 | 第32-33页 |
| ·重组 E. coli sABCD 摇瓶水平的发酵优化 | 第33-37页 |
| ·不同培养基对肝素前体合成影响 | 第33页 |
| ·培养温度对菌体生长和产量的影响 | 第33-34页 |
| ·诱导时机和 IPTG 浓度对菌体生长和产量的影响 | 第34-35页 |
| ·接种量对菌体生长和产量的影响 | 第35-36页 |
| ·诱导时间对菌体生长和产量的影响 | 第36页 |
| ·乳糖替代 IPTG 对菌体生长和产量的影响 | 第36-37页 |
| ·重组 E. coli sABCD 在 3L 发酵罐水平的不同培养模式的发酵优化控制 | 第37-45页 |
| ·分批发酵 | 第37-38页 |
| ·补料分批培养方式下适宜诱导时机的确定 | 第38-41页 |
| ·DO-stat 模式下补料分批培养 | 第41页 |
| ·恒速流加模式下的补料分批培养 | 第41-43页 |
| ·拟指数流加补料 | 第43-45页 |
| ·肝素前体的分子量分布和结构分析 | 第45-50页 |
| ·大肠杆菌 K5 与重组菌的分子量对比 | 第45-47页 |
| ·重组菌和野生菌肝素前体结构对比 | 第47-50页 |
| 第四章 结论与展望 | 第50-52页 |
| ·结论 | 第50-51页 |
| ·展望 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第58页 |
