| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 縮写名词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·植物细胞内的Ca~(2+)转运相关基因的研究进展 | 第13-22页 |
| ·胞质Ca~(2+)内流系统：Ca~(2+)通道 | 第13-15页 |
| ·细胞质膜上的Ca~(2+)通道 | 第14页 |
| ·内膜系统上的Ca~(2+)通道 | 第14-15页 |
| ·胞质Ca~(2+)外流系统：Ca~(2+)/H~+反向转运载体(Ca~(2+)/H~+ antiporter)和Ca~(2+)泵(Ca~(2+)-ATPase | 第15-22页 |
| ·Ca~(2+)泵 | 第15-18页 |
| ·Ca~(2+)/H~+反向转运载体 | 第18-22页 |
| ·立题的目的和意义 | 第22-24页 |
| 2 棉花Ca~(2+)转运相关基因的克隆及表达分析 | 第24-37页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·棉花材料 | 第24页 |
| ·实验主要试剂 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-28页 |
| ·棉花材料“YZ-1”幼苗的非生物逆境胁迫处理 | 第24页 |
| ·Ca~(2+)转运相关基因的克隆 | 第24-26页 |
| ·异硫氰酸胍法提取植物组织RNA | 第25页 |
| ·植物组织RNA浓度及纯度的测定 | 第25页 |
| ·快速扩增cDNA 5’末端(5’-RACE) | 第25-26页 |
| ·快速扩增cDNA 3’末端(3’-RACE) | 第26页 |
| ·基因全长扩增 | 第26页 |
| ·逆境胁迫下Ca~(2+)转运相关基因的表达变化 | 第26-27页 |
| ·引物序列 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-35页 |
| ·拟南芥Ca~(2+)转运相关基因受逆境诱导表达芯片结果分析 | 第28-29页 |
| ·棉花GhCAX1,GhCAX3,GhCXIP2和GhACA2基因在逆境胁迫下的表达分析 | 第29-32页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3,GhCXIP2和GhACA2在NaCl处理下的表达分析 | 第29-30页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3,GhCXIP2和GhACA2对低温处理的表达变化 | 第30-31页 |
| ·PEG处理对GhCAX1,GhCAX3,GhCXIP2和GhACA2基因表达的影响 | 第31-32页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3和GhCXIP2基因克隆及分析 | 第32-34页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3和GhCXIP2基因全长的扩增 | 第32页 |
| ·GhCXIP2氨基酸序列分析 | 第32-33页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3与GhCXIP2二级结构预测 | 第33页 |
| ·GhCAX1和GhCAX3的蛋白分类及N端结构域分析 | 第33-34页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3,GhCXIP2和GhACA2在棉花中的组织表达分析 | 第34-35页 |
| ·分析讨论 | 第35-37页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3与GhCXIP2的结构与功能分析 | 第35页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3,GhCXIP2和GhACA2的组织表达与逆境诱导表达分析 | 第35-37页 |
| 3 重组酵母的鉴定与分析 | 第37-48页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株、载体及培养基 | 第37页 |
| ·实验试剂 | 第37页 |
| ·引物合成 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-41页 |
| ·酵母表达载体piHGPD-(s)GhCAX1,(s)GhCAX3及pYX212-GhCAX1,GhCXIP2的构建 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的酵母转化及分子检测 | 第39-40页 |
| ·酵母转化 | 第39页 |
| ·重组酵母的PCR检测 | 第39页 |
| ·重组酵母Northern检测 | 第39-40页 |
| ·重组酵母Ca~(2+)耐受性分析 | 第40页 |
| ·GhCXIP2,GhCAX3与GhCAX1共表达对其转运Ca~(2+)活性的影响 | 第40页 |
| ·重组酵母突变体K667逆境胁迫处理 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-44页 |
| ·酵母重组表达载体的双酶切鉴定 | 第41页 |
| ·重组酵母的分子检测 | 第41-42页 |
| ·GhCAX1和GhCAX3转运Ca~(2+)的功能 | 第42-43页 |
| ·GhCXIP2,GhCAX3与GhCAX1共表达对载体转运Ca~(2+)活性影响 | 第43-44页 |
| ·重组酵母的抗逆性检测 | 第44页 |
| ·分析与讨论 | 第44-48页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3转运Ca~(2+)的功能分析 | 第44-46页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3抗逆功能分析 | 第46页 |
| ·下一步工作建议 | 第46-48页 |
| 4 CA~(2+)转运相关基因在烟草和棉花中的遗传转化与鉴定 | 第48-60页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·植物材料,菌株和载体 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·实验试剂 | 第48-49页 |
| ·引物合成 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·植物载体构建 | 第49页 |
| ·GhCAX1,GhCAX3,GhCXIP2,GhACA2 RNAi抑制表达载体的构建 | 第49页 |
| ·超量表达载体pGWB417-GhCAX1,GhCAX3和pGWB418-sGhCAX1,sGhCAX3以及pK2GW7-GhCXIP2的构建 | 第49页 |
| ·电击转化农杆菌感受态EHA及分子检测 | 第49-50页 |
| ·农杆菌的转化 | 第49-50页 |
| ·农杆菌重组质粒的PCR检测 | 第50页 |
| ·外植体的遗传转化与鉴定 | 第50-51页 |
| ·陆地棉“YZ-1”的遗传转化 | 第50页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第50页 |
| ·转基因烟草植株的获得 | 第50页 |
| ·转基因烟草耐性分析 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-57页 |
| ·植物RNAi和表达载体的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| ·RNAi载体的双酶切鉴定 | 第51页 |
| ·重组超表达载体的验证 | 第51-52页 |
| ·RNAi及超表达载体转化根癌农杆菌EHA | 第52页 |
| ·陆地棉“YZ-1”的遗传转化 | 第52-53页 |
| ·转基因棉花的获得 | 第53页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第53页 |
| ·转基因T_0代烟草阳性检测 | 第53-54页 |
| ·T_1代单拷贝筛选及表达量鉴定 | 第54页 |
| ·T_1代转基因烟草植株表型的变化 | 第54-55页 |
| ·转基因烟草的初步耐性分析 | 第55-57页 |
| ·T_1代转基因烟草在不含Ca~(2+)的MS培养基上的生长状况 | 第55-56页 |
| ·T1代转基因烟草在含NaCl的MS培养基上的生长状况 | 第56-57页 |
| ·分析讨论 | 第57-60页 |
| ·烟草外源基因拷贝数的鉴定 | 第57页 |
| ·利用烟草作功能辅助分析 | 第57-59页 |
| ·GhCAX1和GhCAX3的表达影响转基因烟草植株的表型 | 第57-58页 |
| ·转基因烟草耐盐性提高 | 第58-59页 |
| ·下一步工作建议 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
