哈氏噬纤维菌电转化条件的优化及表达体系的构建
摘要 | 第1-10页 |
Abstract | 第10-13页 |
缩略词表 | 第13-14页 |
第一章 绪论 | 第14-34页 |
·纤维素的结构 | 第14-16页 |
·降解纤维素的微生物 | 第16-18页 |
·真菌 | 第16-17页 |
·细菌 | 第17页 |
·未培养微生物 | 第17-18页 |
·微生物降解纤维素的机制 | 第18-22页 |
·复合型纤维素酶系 | 第18-19页 |
·非复合型纤维素酶系 | 第19-21页 |
·细胞结合的非复合型纤维素降解酶系 | 第21-22页 |
·启动子概述 | 第22-30页 |
·启动子的结构 | 第23-24页 |
·启动子的类型 | 第24-25页 |
·克隆启动子的方法 | 第25-28页 |
·启动子克隆的意义 | 第28-29页 |
·拟杆菌的启动子概述 | 第29-30页 |
·噬纤维菌属基因转移系统的研究 | 第30-31页 |
·哈氏噬纤维菌的研究现状 | 第31-34页 |
第二章 哈氏噬纤维菌的电转化条件的优化 | 第34-47页 |
·实验材料 | 第34-35页 |
·试剂和仪器 | 第34页 |
·菌种和质粒 | 第34-35页 |
·培养基 | 第35页 |
·抗生素类试剂 | 第35页 |
·实验方法 | 第35-39页 |
·菌体培养 | 第35页 |
·哈氏菌感受态的制备 | 第35-36页 |
·质粒提取 | 第36页 |
·电转化 | 第36-37页 |
·影响电转化效率的不同因素 | 第37-38页 |
·转化效率的计算 | 第38-39页 |
·菌落PCR验证转化子 | 第39页 |
·实验结果与分析 | 第39-45页 |
·转化子验证结果 | 第39-40页 |
·不同培养条件对转化率的影响 | 第40页 |
·不同生长状态对转化率的影响 | 第40-41页 |
·不同电场强度对转化效率的影响 | 第41页 |
·质粒浓度对电转化率的影响 | 第41-42页 |
·复苏时间的影响 | 第42-43页 |
·电击缓冲液对电转化效率的影响 | 第43-44页 |
·其他因素的影响 | 第44-45页 |
·本章小结与讨论 | 第45-47页 |
第三章 哈氏噬纤维菌突变株的构建与性质研究 | 第47-68页 |
·实验材料 | 第47-50页 |
·菌种 | 第47-48页 |
·质粒 | 第48页 |
·培养基 | 第48-49页 |
·抗生素类试剂 | 第49页 |
·试剂和仪器 | 第49页 |
·引物 | 第49-50页 |
·实验方法 | 第50-58页 |
·电转化 | 第50-51页 |
·常规分子生物学方法 | 第51-54页 |
·突变株的分子验证 | 第54-56页 |
·突变株表型验证 | 第56-58页 |
·实验结果与分析 | 第58-67页 |
·突变株中断基因的信息学分析 | 第58-59页 |
·敲除质粒pLYL03_3732的构建 | 第59-60页 |
·电转化 | 第60页 |
·突变株的分子验证 | 第60-62页 |
·突变株表型检测 | 第62-67页 |
·本章小结 | 第67-68页 |
第四章 哈氏噬纤维菌自身强启动子的筛选 | 第68-79页 |
·实验材料 | 第68-71页 |
·试剂和仪器 | 第68-69页 |
·菌种与质粒 | 第69页 |
·培养基 | 第69页 |
·引物 | 第69-71页 |
·实验方法 | 第71-72页 |
·DNA提取 | 第71页 |
·常规分子生物学方法 | 第71页 |
·反向PCR寻找转座子插入位点 | 第71页 |
·启动子基因文库的构建 | 第71-72页 |
·突变子库的筛选 | 第72页 |
·定向PCR扩增启动子片段 | 第72页 |
·实验结果与分析 | 第72-77页 |
·转座子探针质粒构建 | 第72-73页 |
·突变子库的筛选和验证 | 第73-74页 |
·突变株转座子插入位点的确定 | 第74-75页 |
·PCR定向克隆启动子片段 | 第75-76页 |
·定向克隆的强启动子的筛选 | 第76-77页 |
·本章小结与讨论 | 第77-79页 |
第五章 哈氏菌表达体系的初步构建 | 第79-89页 |
·实验材料 | 第79-81页 |
·试剂和仪器 | 第79-80页 |
·菌种和质粒 | 第80页 |
·培养基 | 第80-81页 |
·引物 | 第81页 |
·实验方法 | 第81-84页 |
·CHU_1280的克隆和表达质粒的构建 | 第81-83页 |
·哈氏噬纤维菌的感受态制备及电转化 | 第83页 |
·CHU_1280的自体表达与纯化 | 第83-84页 |
·实验结果与分析 | 第84-87页 |
·表达载体的构建 | 第84-85页 |
·重组蛋白在哈氏噬纤维菌中的表达与纯化 | 第85-87页 |
·本章小结与讨论 | 第87-89页 |
全文总结 | 第89-91页 |
参考文献 | 第91-97页 |
致谢 | 第97-98页 |
学位论文评阅及答辩情况表 | 第98页 |