| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-28页 |
| ·国内外燃料乙醇产业发展概况 | 第12-13页 |
| ·乙醇发酵的新技术研究进展 | 第13-20页 |
| ·乙醇发酵节能技术 | 第13-14页 |
| ·途径工程技术提高乙醇发酵收率的研究 | 第14-18页 |
| ·扩展底物谱 | 第14-16页 |
| ·降低副产物的生成率,提高乙醇产量 | 第16-17页 |
| ·提高乙醇耐受性 | 第17页 |
| ·其他代谢工程手段 | 第17-18页 |
| ·纤维素乙醇技术 | 第18-20页 |
| ·菊芋资源的利用 | 第20-24页 |
| ·菊芋的特点 | 第20-21页 |
| ·菊粉酶研究进展 | 第21-23页 |
| ·菊粉酶基因结构研究 | 第23-24页 |
| ·利用菊芋生产乙醇的现状 | 第24页 |
| ·Kluyveromyces marxianus研究现状 | 第24-26页 |
| ·K.marxianus的代谢和生理特性 | 第25-26页 |
| ·K.marxianus生产乙醇 | 第26页 |
| ·研究思路及预期目标 | 第26-28页 |
| 2 发酵菊芋产乙醇菌种的筛选及产酶条件、酶学性质 | 第28-36页 |
| ·材料和方法 | 第28-30页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| ·菊粉酶生产菌株筛选 | 第28-29页 |
| ·乙醇发酵实验初步考察菌株性能 | 第29页 |
| ·K.marxianus YX01生长过程中菊粉酶的活力研究 | 第29页 |
| ·菊粉酶生产最佳培养基的正交实验 | 第29页 |
| ·培养条件对产酶的影响 | 第29页 |
| ·菊粉酶酶学性质的研究 | 第29-30页 |
| ·酶反应最适pH、最适温度的确定及pH、温度对酶稳定性的测定 | 第29页 |
| ·乙醇对菊粉酶活性的影响 | 第29-30页 |
| ·菊粉酶性质的测定 | 第30页 |
| ·分析方法 | 第30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-35页 |
| ·菌株筛选 | 第30-31页 |
| ·K.marxianus YX01产菊粉酶过程 | 第31页 |
| ·产菊粉酶培养基的优化 | 第31-33页 |
| ·培养条件对产酶的影响 | 第33-34页 |
| ·K.marxianus YX01所产胞外菊粉酶(粗酶)性质研究 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 3 K.marxianus YX01发酵菊粉生产乙醇的研究 | 第36-44页 |
| ·材料和方法 | 第36-37页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·实验仪器 | 第36-37页 |
| ·种子液培养时间对发酵的影响 | 第37页 |
| ·初始pH对发酵的影响 | 第37页 |
| ·最适生长和产酶温度的确定 | 第37页 |
| ·最适发酵温度的确定 | 第37页 |
| ·最适通气量的确定 | 第37页 |
| ·底物浓度对发酵的影响 | 第37页 |
| ·分析方法 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-43页 |
| ·种子液培养时间对发酵的影响 | 第37-38页 |
| ·初始pH对发酵的影响 | 第38-39页 |
| ·最适生长和产酶温度的确定 | 第39页 |
| ·最适发酵温度的确定 | 第39-40页 |
| ·最适通气量的确定 | 第40-42页 |
| ·底物浓度对发酵的影响 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 4 K.marxianus YX01发酵海水灌溉菊芋生产乙醇的研究 | 第44-51页 |
| ·材料和方法 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·种子液的培养方法 | 第44-45页 |
| ·不同浓度海水灌溉菊芋汁对发酵的影响 | 第45页 |
| ·不同粉碎粒度的25%海水灌溉菊芋粉对发酵的影响 | 第45页 |
| ·不同底物浓度的25%海水灌溉菊芋粉对发酵的影响 | 第45页 |
| ·海水灌溉菊芋批式补料发酵 | 第45页 |
| ·分析方法 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-50页 |
| ·不同海水浓度灌溉菊芋成分分析 | 第45-46页 |
| ·不同浓度海水灌溉菊芋的发酵性能 | 第46-47页 |
| ·不同粉碎粒度的25%海水灌溉菊芋粉对发酵的影响 | 第47页 |
| ·不同浓度25%海水灌溉菊芋粉对发酵的影响 | 第47-49页 |
| ·海水灌溉菊芋粉的批式补料发酵 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 5 K.marxianus YX 01乙醇代谢途径的初步构建 | 第51-62页 |
| ·材料和方法 | 第51-53页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·实验仪器 | 第52页 |
| ·种子液的培养方法 | 第52页 |
| ·乙醇的发酵方法 | 第52页 |
| ·色谱分离条件 | 第52页 |
| ·流动相的配制 | 第52页 |
| ·样品的预处理 | 第52页 |
| ·标准溶液制备 | 第52-53页 |
| ·样品的初步定性与定量分析 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-61页 |
| ·检测器的选择 | 第53页 |
| ·流动相pH的选择 | 第53-57页 |
| ·柱温的选择 | 第57-58页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第58-59页 |
| ·方法的回收率和重复性实验 | 第59页 |
| ·K.marxianus YX01菊芋发酵液中的乙醇,糖和有机酸类分析 | 第59-60页 |
| ·K.marxianus YX01乙醇代谢途径的初步构建 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 6 乳酸脱氢酶基因敲除对K.marxianus YX01生长和发酵的影响 | 第62-77页 |
| ·材料和方法 | 第62-66页 |
| ·菌株和质粒 | 第62-63页 |
| ·试剂及培养基 | 第63-64页 |
| ·实验仪器 | 第64页 |
| ·K.marxianus YX01 G418抗性验证 | 第64页 |
| ·K.marxianus YX01基因组提取 | 第64页 |
| ·降落PCR扩增K.marxianus YX01乳酸脱氢酶基因LDH片断 | 第64-65页 |
| ·重组载体的构建 | 第65页 |
| ·同源重组敲除K.marxianus YX01的乳酸脱氢酶基因LDH | 第65页 |
| ·重组子的PCR验证 | 第65-66页 |
| ·LDH部分敲除对K.marxianus YX01生长的影响 | 第66页 |
| ·LDH部分敲除对K.marxianus YX01发酵的影响 | 第66页 |
| ·测定方法 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-76页 |
| ·K.marxianus YX01 G418抗性验证 | 第66-67页 |
| ·乳酸脱氢酶同源重组载体的构建 | 第67-69页 |
| ·LDH部分序列的扩增与测定 | 第69页 |
| ·同源重组载体的构建 | 第69-70页 |
| ·同源重组敲除K.marxianus YX01的LDH基因 | 第70-71页 |
| ·LDH基因敲除对K.marxianus YX01生长的影响 | 第71-72页 |
| ·T_4发酵性能的测定 | 第72-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 7 菊粉酶基因整合载体的构建及在K.marxianus YX01的表达 | 第77-87页 |
| ·材料和方法 | 第77-80页 |
| ·菌株和质粒 | 第77页 |
| ·试剂及培养基 | 第77-78页 |
| ·实验仪器 | 第78页 |
| ·PCR法扩增克鲁维酵母菊粉酶基因P-INU | 第78-79页 |
| ·P-INU整合载体的构建 | 第79页 |
| ·K.marxianus YX01的转化及转化子验证 | 第79页 |
| ·整合子发酵性能考察 | 第79-80页 |
| ·结果与讨论 | 第80-85页 |
| ·P-INU整合载体的构建 | 第80-82页 |
| ·K.marxianus YX01的转化以及对转化子的验证 | 第82页 |
| ·INU整合子发酵性能考察 | 第82-84页 |
| ·批式补料法考察整合子K/INU1发酵菊芋粗粉 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85页 |
| ·小结 | 第85-87页 |
| 结论 | 第87-88页 |
| 创新点 | 第88页 |
| 后续工作展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 附录A | 第100-101页 |
| 附录B | 第101-102页 |
| 附录C | 第102-103页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105-106页 |
