| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-17页 |
| 英文缩写及名称 | 第17-19页 |
| 第一篇 文献综述 | 第19-49页 |
| 第一章 日本脑炎病毒及其疫苗的研究进展 | 第19-31页 |
| 1 JEV的分子生物学特性 | 第19-22页 |
| ·JEV的基因组特性 | 第19页 |
| ·JEV的结构蛋白和非结构蛋白特性 | 第19-21页 |
| ·JEV的基因分型 | 第21-22页 |
| 2 JEV扩散的机制 | 第22页 |
| 3 JEV的毒力及致病机理 | 第22-24页 |
| 4 JEV疫苗的研究概况 | 第24-27页 |
| ·传统的鼠源灭活疫苗 | 第24页 |
| ·减毒活疫苗 | 第24-25页 |
| ·DNA疫苗 | 第25页 |
| ·嵌合病毒减毒活疫苗 | 第25页 |
| ·单位疫苗 | 第25-26页 |
| ·全长基因组cDNA减毒活疫苗 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-31页 |
| 第二章 动物RNA病毒反向遗传技术的研究进展 | 第31-41页 |
| 1 动物RNA病毒反向遗传系统的构建策略 | 第31-33页 |
| ·全长cDNA的构建 | 第31-32页 |
| ·感染性转录物的产生 | 第32-33页 |
| 2 不同类型的动物RNA病毒反向遗传技术的操作策略 | 第33-35页 |
| ·正链RNA病毒反向遗传技术 | 第33-34页 |
| ·负链RNA病毒的反向遗传技术 | 第34-35页 |
| 3 反向遗传操作的应用 | 第35-38页 |
| ·用于病毒基因结构、功能以及致病力的研究 | 第35-36页 |
| ·用于疫苗的研制 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 第三章 病毒囊膜蛋白N-糖基化的生物学功能 | 第41-49页 |
| 1 病毒蛋白质的糖链 | 第41-42页 |
| 2 N-糖基化修饰病毒 | 第42-43页 |
| 3 糖基化在病毒胞膜蛋白转运折叠和分泌中的作用 | 第43-44页 |
| 4 糖基化对病毒毒力的影响 | 第44-45页 |
| 5 糖基化对病毒蛋白免疫原性的影响 | 第45页 |
| 6 糖基化与病毒感染 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 第二篇 研究内容 | 第49-139页 |
| 第四章 猪源乙型脑炎病毒NJ2008株全基因克隆及序列分析 | 第49-65页 |
| 1 材料与方法 | 第50-55页 |
| ·病毒、质粒、菌株及细胞 | 第50页 |
| ·主要试剂、工具酶 | 第50-51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·NJ2008株RNA的提取、RT-PCR及克隆 | 第51-54页 |
| ·序列分析 | 第54页 |
| ·病毒细胞TCID_(50)测定 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-60页 |
| ·JEV NJ2008株各片段RT-PCR扩增结果 | 第55页 |
| ·新分离乙脑NJ2008病毒株的基因特性分析 | 第55-59页 |
| ·JEV NJ2008株在BHK-21细胞上生长滴度的测定 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 第五章 猪源乙型脑炎病毒NJ2008株感染性克隆的构建及鉴定 | 第65-79页 |
| 1 材料和方法 | 第66-72页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·JEV NJ2008株全长cDNA克隆的构建 | 第66-70页 |
| ·病毒的拯救 | 第70-71页 |
| ·JEV NJ2008株感染性克隆的鉴定 | 第71-72页 |
| 2 结果 | 第72-75页 |
| ·JEV NJ2008株各片段RT-PCR扩增结果 | 第72-73页 |
| ·JEV NJ2008株SUP和HYPO片段PCR扩增结果及酶切 | 第73-74页 |
| ·JEV NJ2008株全长cDNA的鉴定 | 第74页 |
| ·JEV NJ2008株感染性克隆的鉴定 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 第六章 猪源乙脑病毒E138位突变株感染性克隆的构建与病毒拯救 | 第79-95页 |
| 1 材料和方法 | 第80-85页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·E138突变株全长cDNA克隆的构建 | 第80-82页 |
| ·病毒的拯救 | 第82-83页 |
| ·E138突变感染性克隆病毒株的鉴定及生物学特性分析 | 第83-85页 |
| 2 结果 | 第85-90页 |
| ·片段SUP1和重组质粒pSK-HYPO的酶切 | 第85-86页 |
| ·E138突变感染性克隆病毒株的连接 | 第86-87页 |
| ·E138突变感染性克隆病毒株的鉴定 | 第87-90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-95页 |
| 第七章 猪源乙脑病毒NJ2008株N-糖基化位点的突变影响病毒的复制、胞内定位以及致病力 | 第95-111页 |
| 1 材料和方法 | 第96-101页 |
| ·实验材料 | 第96页 |
| ·N154突变株全长cDNA克隆的构建 | 第96-98页 |
| ·病毒的拯救 | 第98-99页 |
| ·N154突变株感染性克隆的鉴定及生物学特性分析 | 第99-101页 |
| 2 结果 | 第101-106页 |
| ·片段SUP2和重组质粒pSK-HYPO的酶切 | 第101-102页 |
| ·N154突变感染性克隆病毒株的连接 | 第102-103页 |
| ·N154突变感染性克隆病毒株的鉴定 | 第103-106页 |
| 3 讨论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-111页 |
| 第八章 猪源乙脑病毒prM-E蛋白及其N-糖基化位点突变体的真核质粒构建 | 第111-127页 |
| 1 材料与方法 | 第112-118页 |
| ·材料 | 第112页 |
| ·重组真核表达载体pVAXI-prME的构建 | 第112-115页 |
| ·N-糖基化位点突变重组表达质粒的构建 | 第115-117页 |
| ·质粒的大量提取 | 第117页 |
| ·重组真核质粒的体外表达与鉴定 | 第117-118页 |
| 2 结果 | 第118-121页 |
| ·重组亲本及突变表达质粒的构建 | 第118-119页 |
| ·Western-blot分析结果 | 第119-120页 |
| ·IFA鉴定结果 | 第120-121页 |
| 3 讨论 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-127页 |
| 第九章 猪源乙脑病毒prM、E蛋白N-糖基化位点对Balb/c小鼠的特异性免疫影响 | 第127-139页 |
| 1 材料与方法 | 第128-130页 |
| ·材料及试验动物 | 第128页 |
| ·方法 | 第128-130页 |
| 2 结果 | 第130-134页 |
| ·JEV病毒抗体和抗体亚型检测 | 第130-132页 |
| ·脾T细胞亚群分析 | 第132页 |
| ·血清中IL-4和IFN-γ的测定 | 第132-133页 |
| ·JEV中和抗体的产生及对致死量JEV的保护力 | 第133-134页 |
| 3 讨论 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-139页 |
| 全文总结 | 第139-141页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第141-143页 |
| 致谢 | 第143页 |
