| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 常用符号及缩略语说明 | 第17-18页 |
| 第一篇 文献综述 | 第18-56页 |
| 第一章 肠道外致病性大肠杆菌致病机理研究进展 | 第18-36页 |
| 1 大肠杆菌的主要特性 | 第18-19页 |
| 2 肠道外致病性大肠杆菌的危害 | 第19-20页 |
| 3 致病性大肠杆菌的毒力因子 | 第20-26页 |
| ·黏附素(Adhesin) | 第21-22页 |
| ·摄铁系统(Ferric uptake regulator,Fur) | 第22-23页 |
| ·溶血素(Haemolysin) | 第23页 |
| ·抗血清存活因子 | 第23-25页 |
| ·空泡形成毒素(Vacuolating autotransporter toxin,Vat) | 第25-26页 |
| ·侵袭相关蛋白 | 第26页 |
| 4 肠道外致病变性大肠杆菌致病机理 | 第26-30页 |
| ·尿道致病性大肠杆菌(UPEC)致病机理 | 第26-28页 |
| ·新生儿脑膜炎大肠杆菌(NMEC)致病机理 | 第28-29页 |
| ·禽致病性大肠杆菌(APEC)致病机理 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-36页 |
| 第二章 大肠杆菌穿透血脑屏障机制研究进展 | 第36-48页 |
| 1 血脑屏障 | 第36-37页 |
| ·血脑屏障的特点 | 第36页 |
| ·脑血管内皮细胞的分离和培养 | 第36-37页 |
| ·脑膜炎动物模型:血脑屏障的体内模型 | 第37页 |
| 2 大肠杆菌侵袭相关毒力因子 | 第37-39页 |
| ·K1荚膜 | 第38页 |
| ·Ibe蛋白 | 第38页 |
| ·OmpA | 第38页 |
| ·CNF1 | 第38-39页 |
| ·其他毒力因子 | 第39页 |
| 3 宿主受体蛋白 | 第39-40页 |
| ·脑血管内皮细胞表面受体 | 第39-40页 |
| ·纤维蛋白溶酶原介导的血脑屏障通透作用 | 第40页 |
| 4 大肠杆菌穿透血脑屏障的过程 | 第40-43页 |
| ·菌血症 | 第40-41页 |
| ·黏附BMEC | 第41页 |
| ·大肠杆菌侵袭血脑屏障及细胞骨架重排 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌在穿透血脑屏障过程中保持活性 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 第三章 Red同源重组系统研究进展 | 第48-56页 |
| 1 Red同源重组系统的结构 | 第48-50页 |
| 2 Red同源重组系统的重组机制 | 第50页 |
| 3 Red同源重组方案 | 第50-51页 |
| ·Wanner重组方案 | 第50页 |
| ·Court重组方案 | 第50-51页 |
| 4 Red同源重组系统的优点及应用前景 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 第二篇 试验研究 | 第56-150页 |
| 第四章 禽致病性大肠杆菌自分泌黏附素基因aatA的序列分析、流行病学调查及克隆表达 | 第56-78页 |
| 1 材料与方法 | 第57-62页 |
| ·菌株和质粒 | 第57页 |
| ·试剂与仪器 | 第57页 |
| ·引物设计 | 第57-58页 |
| ·aatA在不同致病性大肠杆菌中的分布 | 第58页 |
| ·大肠杆菌系统进化群分析 | 第58-59页 |
| ·序列分析 | 第59-60页 |
| ·自分泌黏附素基因aatA的克隆表达 | 第60-61页 |
| ·免疫血清的制备 | 第61页 |
| ·Western blot | 第61页 |
| ·黏附抑制试验 | 第61-62页 |
| 2 结果 | 第62-71页 |
| ·大肠杆菌进化群分析 | 第62页 |
| ·自分泌黏附素基因aatA在不同致病性大肠杆菌中的分布 | 第62-64页 |
| ·aatA序列分析 | 第64-68页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第68-69页 |
| ·AatA表达情况 | 第69-70页 |
| ·黏附抑制试验 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 第五章 禽致病性大肠杆菌DE205B自分泌黏附素基因aatA缺失株、互补株的构建及特性分析 | 第78-98页 |
| 1 材料与方法 | 第79-85页 |
| ·菌株和质粒 | 第79页 |
| ·试剂与仪器 | 第79-80页 |
| ·引物设计 | 第80-81页 |
| ·缺失株的构建 | 第81页 |
| ·互补株的构建 | 第81-82页 |
| ·Western blot | 第82页 |
| ·遗传稳定性分析及生长曲线测定 | 第82页 |
| ·血清杀菌试验 | 第82页 |
| ·凝集试验 | 第82-83页 |
| ·半数致死量(LD_(50))的测定 | 第83页 |
| ·细胞黏附试验 | 第83-84页 |
| ·动物感染试验 | 第84页 |
| ·细菌RNA提取及荧光定量PCR | 第84-85页 |
| 2 结果 | 第85-92页 |
| ·aatA缺失株的构建及鉴定 | 第85-86页 |
| ·互补株的构建及鉴定 | 第86-87页 |
| ·缺失株和互补株的主要生物学特性分析 | 第87-88页 |
| ·不同菌株AatA的表达 | 第88-89页 |
| ·半数致死量(LD_(50))的测定 | 第89-90页 |
| ·凝集试验 | 第90页 |
| ·黏附试验 | 第90-91页 |
| ·动物感染试验 | 第91-92页 |
| ·荧光定量PCR | 第92页 |
| 3 讨论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-97页 |
| 附录 | 第97-98页 |
| 第六章 禽致病性大肠杆菌DE205B侵袭素基因ibeA的序列分析、流行病学调查及克隆表达 | 第98-110页 |
| 1 材料与方法 | 第99-101页 |
| ·菌株和质粒 | 第99页 |
| ·引物设计 | 第99页 |
| ·ibeA在禽致病性大肠杆菌中的分布 | 第99页 |
| ·大肠杆菌系统进化群分析 | 第99-100页 |
| ·序列分析 | 第100页 |
| ·ibeA ORF的克隆表达 | 第100页 |
| ·纯化蛋白免疫血清的制备 | 第100-101页 |
| ·侵袭抑制试验 | 第101页 |
| 2 结果 | 第101-104页 |
| ·大肠杆菌进化群PCR分析 | 第101页 |
| ·侵袭素基因ibeA在禽致病性大肠杆菌中的分布 | 第101-102页 |
| ·序列分析 | 第102页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第102-104页 |
| ·侵袭抑制试验 | 第104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-109页 |
| 附录 | 第109-110页 |
| 第七章 禽致病性大肠杆菌DE205B侵袭素基因ibeA缺失株、互补株的构建及特性分析 | 第110-128页 |
| 1 材料与方法 | 第111-114页 |
| ·菌株和质粒 | 第111页 |
| ·引物设计 | 第111-112页 |
| ·缺失株的构建 | 第112-113页 |
| ·互补株的构建 | 第113页 |
| ·Westem blot | 第113页 |
| ·遗传稳定性分析及生长曲线测定 | 第113页 |
| ·生物被膜形成试验 | 第113-114页 |
| ·半数致死量(LD_(50))的测定 | 第114页 |
| ·细胞侵袭试验 | 第114页 |
| ·动物感染试验 | 第114页 |
| ·细菌RNA提取及荧光定量PCR | 第114页 |
| 2 结果 | 第114-120页 |
| ·缺失株的构建及鉴定 | 第114-116页 |
| ·互补株的构建及鉴定 | 第116页 |
| ·缺失株的主要生物学特性分析 | 第116页 |
| ·不同菌株IbeA的表达 | 第116-118页 |
| ·半数致死量(LD_(50))的测定 | 第118页 |
| ·生物被膜形成能力 | 第118-119页 |
| ·细胞侵袭试验 | 第119页 |
| ·动物感染试验 | 第119-120页 |
| ·荧光定量PCR | 第120页 |
| 3 讨论 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-126页 |
| 附录 | 第126-128页 |
| 第八章 禽致病性大肠杆菌DE205B aatA和ibeA双基因缺失株的构建及生物学特性分析 | 第128-138页 |
| 1 材料与方法 | 第129-130页 |
| ·菌株和质粒 | 第129页 |
| ·aatA、ibeA双基因缺失株的构建 | 第129页 |
| ·遗传稳定性分析及生长曲线测定 | 第129页 |
| ·半数致死量(LD_(50))的测定 | 第129页 |
| ·细胞黏附试验、细胞侵袭试验和动物感染试验 | 第129-130页 |
| 2 结果 | 第130-133页 |
| ·双基因缺失株及互补株的构建及鉴定 | 第130页 |
| ·双基因缺失株的主要生物学特性分析 | 第130页 |
| ·半数致死量(LD_(50))的测定 | 第130-131页 |
| ·细胞黏附及侵袭试验 | 第131-132页 |
| ·动物感染试验 | 第132-133页 |
| 3 讨论 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-136页 |
| 附录 | 第136-138页 |
| 第九章 禽致病性大肠杆菌DE205B毒力岛GimA调控蛋白IbeR的致病作用 | 第138-150页 |
| 1 材料与方法 | 第138-140页 |
| ·菌株和质粒 | 第138-139页 |
| ·引物设计 | 第139-140页 |
| ·序列分析 | 第140页 |
| ·ibeR在禽致病性大肠杆菌中的分布 | 第140页 |
| ·缺失株、互补株的构建 | 第140页 |
| ·遗传稳定性分析及生长曲线测定 | 第140页 |
| ·半数致死量(LD_(50))的测定 | 第140页 |
| ·细胞侵袭试验和动物感染试验 | 第140页 |
| 2 结果 | 第140-144页 |
| ·序列分析 | 第140-141页 |
| ·ibeR在禽致病性大肠杆菌中的分布 | 第141页 |
| ·缺失株的构建及鉴定 | 第141页 |
| ·互补株的构建及鉴定 | 第141页 |
| ·缺失株的主要生物学特性分析 | 第141-143页 |
| ·半数致死量(LD_(50))的测定 | 第143页 |
| ·细胞侵袭试验 | 第143页 |
| ·动物感染试验 | 第143-144页 |
| 3 讨论 | 第144-146页 |
| 参考文献 | 第146-148页 |
| 附录 | 第148-150页 |
| 全文总结 | 第150-152页 |
| 致谢 | 第152-154页 |
| 攻读博士期间发表及待发表的文章 | 第154页 |
