| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 1 绪论 | 第12-20页 |
| ·转基因抗虫植物 | 第12页 |
| ·营养期杀虫蛋白 | 第12-16页 |
| ·Vips 的类型 | 第12-13页 |
| ·Vip3A 及其杀虫活性 | 第13-14页 |
| ·Vip3A 蛋白的特性 | 第14-15页 |
| ·Vip3A 蛋白作用机理 | 第15页 |
| ·Vip3A 的应用与研究展望 | 第15-16页 |
| ·植物启动子在转基因抗虫植物中的应用 | 第16-18页 |
| ·植物启动子 | 第16-17页 |
| ·植物组织特异表达启动子研究 | 第17-18页 |
| ·本文研究的目的和内容 | 第18-20页 |
| ·本文研究的目的意义 | 第18页 |
| ·本文研究的主要内容 | 第18-19页 |
| ·本文研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 2 VIP3A 基因的克隆及载体构建 | 第20-31页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·酶及试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·培养基及试剂的制备 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·苏云芽孢杆菌总DNA 的制备（热裂解法） | 第21页 |
| ·大肠杆菌JM109 感受态细胞的制备（CaC12 法） | 第21页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳DNA 片段的回收 | 第22页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·苏云芽孢杆菌Vip3A 基因的PCR 扩增 | 第23-24页 |
| ·Vip3A 基因的载体构建 | 第24-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-31页 |
| ·Vip3A 基因的PCR 扩增 | 第26页 |
| ·Vip3A 基因的载体构建 | 第26-27页 |
| ·测序及序列分析 | 第27-31页 |
| 3 EF1Α启动子的克隆与载体构建 | 第31-41页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·植物材料和质粒 | 第31页 |
| ·酶及试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-36页 |
| ·烟草基因组DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·EF1α启动子PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌JM109 感受态细胞的制备（见2.2.2） | 第33页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌（见2.2.3） | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳DNA 片段的回收（见2.2.4） | 第33页 |
| ·质粒DNA 的提取（见2.2.5） | 第33页 |
| ·EF1-α启动子的载体构建 | 第33-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-41页 |
| ·烟草基因组DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·EF1Α启动子PCR 扩增 | 第37页 |
| ·EF1α启动子的载体构建 | 第37-39页 |
| ·测序及启动子序列分析 | 第39-41页 |
| 4 烟草的遗传转化 | 第41-52页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·植物材料及菌株 | 第41页 |
| ·酶及试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·溶液制备 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·农杆菌GV3101 感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·重组质粒转化农杆菌 | 第43页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第43-44页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第44-45页 |
| ·GUS 染色检测 | 第45页 |
| ·烟草总RNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·转基因烟草的RT-PCR 检测 | 第46页 |
| ·结果分析 | 第46-52页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌的PCR 检测 | 第46-47页 |
| ·转基因烟草植株的获得 | 第47-49页 |
| ·GUS 基因的表达检测 | 第49页 |
| ·转基因植株的半定量RT-PCR 检测 | 第49-52页 |
| 5 讨论 | 第52-54页 |
| ·VIP3A 基因的克隆 | 第52页 |
| ·EF1Α启动子的克隆 | 第52-53页 |
| ·植物表达载体的构建及烟草的遗传转化 | 第53-54页 |
| 6 结论与展望 | 第54-55页 |
| ·主要结论 | 第54页 |
| ·后续实验工作及展望 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
