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Vip3A基因和EF1α启动子的克隆、载体构建及其对烟草的转化研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
1 绪论第12-20页
   ·转基因抗虫植物第12页
   ·营养期杀虫蛋白第12-16页
     ·Vips 的类型第12-13页
     ·Vip3A 及其杀虫活性第13-14页
     ·Vip3A 蛋白的特性第14-15页
     ·Vip3A 蛋白作用机理第15页
     ·Vip3A 的应用与研究展望第15-16页
   ·植物启动子在转基因抗虫植物中的应用第16-18页
     ·植物启动子第16-17页
     ·植物组织特异表达启动子研究第17-18页
   ·本文研究的目的和内容第18-20页
     ·本文研究的目的意义第18页
     ·本文研究的主要内容第18-19页
     ·本文研究的技术路线第19-20页
2 VIP3A 基因的克隆及载体构建第20-31页
   ·材料第20-21页
     ·菌株和质粒第20页
     ·酶及试剂第20页
     ·主要仪器第20页
     ·培养基及试剂的制备第20-21页
   ·实验方法第21-26页
     ·苏云芽孢杆菌总DNA 的制备(热裂解法)第21页
     ·大肠杆菌JM109 感受态细胞的制备(CaC12 法)第21页
     ·重组质粒转化大肠杆菌第21-22页
     ·琼脂糖凝胶电泳DNA 片段的回收第22页
     ·质粒DNA 的提取第22-23页
     ·苏云芽孢杆菌Vip3A 基因的PCR 扩增第23-24页
     ·Vip3A 基因的载体构建第24-26页
   ·结果与分析第26-31页
     ·Vip3A 基因的PCR 扩增第26页
     ·Vip3A 基因的载体构建第26-27页
     ·测序及序列分析第27-31页
3 EF1Α启动子的克隆与载体构建第31-41页
   ·材料第31页
     ·植物材料和质粒第31页
     ·酶及试剂第31页
     ·主要仪器第31页
   ·实验方法第31-36页
     ·烟草基因组DNA 的提取第31-32页
     ·EF1α启动子PCR 扩增第32-33页
     ·大肠杆菌JM109 感受态细胞的制备(见2.2.2)第33页
     ·重组质粒转化大肠杆菌(见2.2.3)第33页
     ·琼脂糖凝胶电泳DNA 片段的回收(见2.2.4)第33页
     ·质粒DNA 的提取(见2.2.5)第33页
     ·EF1-α启动子的载体构建第33-36页
   ·结果与分析第36-41页
     ·烟草基因组DNA 的提取第36-37页
     ·EF1Α启动子PCR 扩增第37页
     ·EF1α启动子的载体构建第37-39页
     ·测序及启动子序列分析第39-41页
4 烟草的遗传转化第41-52页
   ·材料第41-43页
     ·植物材料及菌株第41页
     ·酶及试剂第41页
     ·主要仪器第41页
     ·培养基第41-42页
     ·溶液制备第42-43页
   ·实验方法第43-46页
     ·农杆菌GV3101 感受态细胞的制备第43页
     ·重组质粒转化农杆菌第43页
     ·叶盘法转化烟草第43-44页
     ·转基因植株的PCR 检测第44-45页
     ·GUS 染色检测第45页
     ·烟草总RNA 的提取第45-46页
     ·转基因烟草的RT-PCR 检测第46页
   ·结果分析第46-52页
     ·植物表达载体转化农杆菌的PCR 检测第46-47页
     ·转基因烟草植株的获得第47-49页
     ·GUS 基因的表达检测第49页
     ·转基因植株的半定量RT-PCR 检测第49-52页
5 讨论第52-54页
   ·VIP3A 基因的克隆第52页
   ·EF1Α启动子的克隆第52-53页
   ·植物表达载体的构建及烟草的遗传转化第53-54页
6 结论与展望第54-55页
   ·主要结论第54页
   ·后续实验工作及展望第54-55页
致谢第55-56页
参考文献第56-60页
附录第60-62页

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