降解纤维素嗜热菌的筛选及其功能基因克隆
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-27页 |
| ·生物质能源 | 第10-14页 |
| ·发展生物质能源的意义 | 第10-11页 |
| ·国内外生物质能开发现状 | 第11-14页 |
| ·生物质能的开发利用前景 | 第14页 |
| ·降解纤维素微生物及其纤维素酶的研究进展 | 第14-25页 |
| ·利用纤维素的微生物 | 第15页 |
| ·产纤维素酶微生物选育 | 第15-17页 |
| ·纤维素酶组分 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶降解机制 | 第18页 |
| ·纤维素酶的分子结构与功能 | 第18-19页 |
| ·嗜热纤维素降解菌的研究进展 | 第19-20页 |
| ·耐热纤维素酶研究现状 | 第20-22页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第22-24页 |
| ·纤维素酶研究存在的问题与展望 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 材料和方法 | 第27-36页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·样品 | 第27页 |
| ·菌种和载体 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·引物 | 第27-28页 |
| ·基本方法 | 第28-36页 |
| ·革兰氏阳性菌基因组总DNA的提取 | 第28页 |
| ·PCR反应 | 第28-29页 |
| ·从琼脂糖凝胶上回收DNA片段 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·化学感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·化学转化 | 第29-30页 |
| ·质粒小量提取 | 第30页 |
| ·双酶切反应验证 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE细菌全蛋白比较分析 | 第30-31页 |
| ·菌种分离 | 第31-32页 |
| ·粗酶液的制备 | 第32页 |
| ·酶活力的测定 | 第32-34页 |
| ·发酵条件研究 | 第34页 |
| ·酶性质测定 | 第34页 |
| ·纤维素酶酶谱 | 第34页 |
| ·发酵产物分析 | 第34-35页 |
| ·核酸测序及序列分析 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-56页 |
| ·嗜热菌的分离与鉴定 | 第36-40页 |
| ·嗜热菌的分离培养 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE初步鉴定 | 第36页 |
| ·革兰氏染色结果 | 第36页 |
| ·16S rDNA鉴定 | 第36-39页 |
| ·嗜热菌表型特征 | 第39-40页 |
| ·产纤维素酶嗜热菌的筛选 | 第40-41页 |
| ·菌株鉴定结果 | 第41-43页 |
| ·产纤维素酶嗜热菌的表型特征 | 第41页 |
| ·产纤维素酶嗜热菌的16SrDNA鉴定 | 第41-43页 |
| ·发酵条件研究 | 第43-47页 |
| ·发酵时间对细菌生长和产酶的影响 | 第43-44页 |
| ·培养温度对细菌生长和产酶的影响 | 第44-45页 |
| ·培养基初始pH对细菌生长和产酶的影响 | 第45页 |
| ·装液量对细菌生长和产酶的影响 | 第45-46页 |
| ·接种量对细菌生长和产酶的影响 | 第46-47页 |
| ·耐热纤维素酶性质初步分析 | 第47-49页 |
| ·酶反应最适温度 | 第47页 |
| ·酶的热稳定性 | 第47-48页 |
| ·酶反应最适pH | 第48-49页 |
| ·纤维素酶降解产物分析 | 第49-50页 |
| ·耐热纤维素酶基因克隆 | 第50-56页 |
| ·PCR扩增 | 第50页 |
| ·克隆 | 第50-51页 |
| ·测序及序列分析 | 第51-54页 |
| ·TC-S8 GL序列同源性分析 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| ·嗜热细菌的分离与鉴定 | 第56页 |
| ·产胞外纤维素酶嗜热菌的筛选 | 第56-57页 |
| ·产胞外纤维素酶嗜热菌TC-S8的鉴定 | 第57页 |
| ·产酶种类及酶的性质 | 第57-58页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第58-59页 |
| 5 结论与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 附录一.本研究中相关菌株的16S rDNA序列 | 第71-77页 |
| 附录二.培养基与试剂配制 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
