| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-21页 |
| 第一章 前言 | 第21-24页 |
| 第二章 文献回顾 | 第24-65页 |
| ·HPV 分类 | 第24-27页 |
| ·HPV 基因组结构和编码产物 | 第27-31页 |
| ·HPV 基因组LCR 结构 | 第29-30页 |
| ·HPV 基因早期区 | 第30页 |
| ·HPV 基因晚期区 | 第30页 |
| ·HPV 基因产物及其功能 | 第30-31页 |
| ·HPV 结构 | 第31-34页 |
| ·HPV 传播方式 | 第34-36页 |
| ·性接触传播 | 第35页 |
| ·非性途径传播 | 第35页 |
| ·HPV 在细胞之间的传播 | 第35-36页 |
| ·HPV 受体及其吸附 | 第36-38页 |
| ·HPV 的内化 | 第38-40页 |
| ·宿主细胞的内吞机制 | 第39-40页 |
| ·HPV 的内吞机制 | 第40页 |
| ·细胞内转运 | 第40-41页 |
| ·HPV 的脱颗粒 | 第41-42页 |
| ·病毒基因组及衣壳的入核机制 | 第42-46页 |
| ·HPV DNA 存在方式 | 第46-49页 |
| ·HPVDNA 染色体外游离形式 | 第46-47页 |
| ·HPVDNA 的整合 | 第47-49页 |
| ·HPV 的共感染 | 第49页 |
| ·HPV 致病性 | 第49-50页 |
| ·HPV 转录、复制的调节 | 第50-54页 |
| ·HPV 的复制和转录 | 第54-55页 |
| ·HPV 衣壳蛋白的入核过程（参见2.9 相关内容） | 第55-56页 |
| ·L2 衣壳蛋白的入核过程 | 第55页 |
| ·L1 衣壳蛋白的入核过程 | 第55-56页 |
| ·HPV 衣壳的装配和成熟（参见2.3 相关内容） | 第56-59页 |
| ·HPV 的释放 | 第59-60页 |
| ·HPV 免疫逃逸 | 第60-62页 |
| ·HPV 感染的清除 | 第62页 |
| ·HPV 感染的相关因素 | 第62-63页 |
| ·结语 | 第63-65页 |
| 第三章 HPV L1 NLS 的生物信息学分析 | 第65-73页 |
| ·数据来源和使用软件、程序 | 第65-66页 |
| ·数据 来 源 | 第65-66页 |
| ·使用软件、程序 | 第66页 |
| ·方法 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-71页 |
| ·讨论 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第四章 HPV16L1 蛋白入核的动力学观察 | 第73-105页 |
| ·实验材料 | 第73-77页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第73-74页 |
| ·主要试剂 | 第74-75页 |
| ·主要溶液、缓冲液和培养液 | 第75-76页 |
| ·主要仪器和设备 | 第76-77页 |
| ·实验方法 | 第77-86页 |
| ·PCR 引物设计 | 第78页 |
| ·四种重组PFASTBAC-HTB 转移载体的构建 | 第78-82页 |
| ·重组pFB-EGFP 转移载体的构建 | 第79-80页 |
| ·重组pFB-EGFP-HPV16L1 转移载体的构建 | 第80页 |
| ·重组pFB-EGFP-HPV16L1△nls 转移载体的构建 | 第80-81页 |
| ·重组pFB-EGFP-NLSHPV16L1 转移载体的构建 | 第81-82页 |
| ·重组BACMID DNA 的制备 | 第82-83页 |
| ·重组杆状病毒辅助表达载体的转座反应 | 第82页 |
| ·重组Bacmid DNA 的提取和鉴定 | 第82-83页 |
| ·重组BACMID DNA 转染SF-9 细胞 | 第83-84页 |
| ·Sf-9 细胞的培养 | 第83页 |
| ·转染 Sf-9 细胞 | 第83-84页 |
| ·重组杆状病毒的收获 | 第84页 |
| ·重组杆状病毒的接种方法 | 第84页 |
| ·HPV16 L1 NLS 入核动力学观察 | 第84页 |
| ·倒置荧光显微镜观察 | 第84页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第84页 |
| ·免疫组化检测EGFP 标记融合蛋白的表达 | 第84页 |
| ·电子显微镜观察EGFP 标记的HPV16VLP 的形成 | 第84-85页 |
| ·非变性条件下纯化EGFP 标记的融合蛋白（方法见PROBONDTM 操作方法） | 第85页 |
| ·ProBondTM Column 的准备 | 第85页 |
| ·感染重组杆状病毒的Sf-9 细胞裂解液的制备 | 第85页 |
| ·蛋白纯化 | 第85页 |
| ·EGFP 融合蛋白的检测 | 第85-86页 |
| ·Western blot 检测EGFP-HPV16L1 和EGFP-HPV16L1△NLS 融合蛋白 | 第85-86页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测EGFP | 第86页 |
| ·小鼠红细胞凝集与凝集抑制试验 | 第86页 |
| ·制备小鼠红细胞悬液 | 第86页 |
| ·小鼠红细胞凝集试验 | 第86页 |
| ·小鼠红细胞凝集抑制试验 | 第86页 |
| ·实验结果 | 第86-96页 |
| ·四种重组PFASTBAC-HTB 转移载体的构建 | 第86-90页 |
| ·重组pFB-EGFP 转移载体的构建 | 第86-88页 |
| ·重组pFB-EGFP-HPV16L1 转移载体的构建 | 第88-89页 |
| ·重组pFB-EGFP-HPV16L1△nls 转移载体的构建 | 第89页 |
| ·重组pFB-EGFP-NLSHPV16L1 转移载体的鉴定 | 第89-90页 |
| ·重组BACMID DNA 的鉴定 | 第90-91页 |
| ·重组杆状病毒转染后SF-9 细胞的细胞病理学改变 | 第91页 |
| ·HPV16 L1 NLS 入核动力学观察 | 第91-92页 |
| ·HPV16 L1 NLS 介导的EGFP 在SF-9 细胞内的转运的动力学过程 | 第91-92页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察EGFP 融合蛋白的亚细胞定位 | 第92页 |
| ·免疫组化检测EGFP 标记融合蛋白的表达 | 第92页 |
| ·电子显微镜观察EGFP 标记的HPV16VLP 的形成 | 第92-94页 |
| ·EGFP 标记的融合蛋白的纯化和检测 | 第94-95页 |
| ·Western blot 检测EGFP-HPV16L1 和EGFP-HPV16L1△NLS 融合蛋白 | 第94页 |
| ·EGFP 的纯化和检测 | 第94页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测EGFP | 第94-95页 |
| ·小鼠红细胞凝集与凝集抑制试验 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96-104页 |
| ·可表达EGFP 融合蛋白的PFB-EGFP 昆虫细胞杆状病毒表达载体的构建 | 第98-99页 |
| ·HPV16 L1 蛋白的入核动力学过程 | 第99-101页 |
| ·EGFP 标记的HPV16 L1VLP | 第101-103页 |
| ·NLS HPV16L1 对蛋白表达和纯化的影响 | 第103-104页 |
| ·小结 | 第104-105页 |
| 第五章 NLS 影响DNA 疫苗诱发的体液免疫应答水平 | 第105-116页 |
| ·实验材料 | 第106-108页 |
| ·质粒、菌株、细胞和实验动物 | 第106-107页 |
| ·酶和抗体及主要试剂 | 第107页 |
| ·主要溶液、培养基、缓冲液 | 第107页 |
| ·主要仪器和设备 | 第107-108页 |
| ·实验方法 | 第108-111页 |
| ·PCR 引物设计 | 第108页 |
| ·重组PCDNA 真核表达载体的构建 | 第108-110页 |
| ·pcDNA3.1(+)质粒制备 | 第108-109页 |
| ·pFB-EGFP-HPV16L1 和pFB-EGFP-HPV16L1△NLS 质粒制备 | 第109页 |
| ·EGFP-HPV16L1 和EGFP-HPV16L1△NLS 融合基因片段的获得 | 第109-110页 |
| ·pcDNA3.1(+)质粒和融合基因片段的双酶切及回收 | 第110页 |
| ·重组pcDNA3.1(+)真核表达质粒的构建和鉴定 | 第110页 |
| ·重组PCDNA 真核表达质粒的大量提取及纯化 | 第110页 |
| ·重组PCDNA 真核表达质粒转染CHO 细胞 | 第110-111页 |
| ·重组质粒免疫BALB/C 小鼠 | 第111页 |
| ·ELISA 法检测血清抗体 | 第111页 |
| ·统计学处理方法 | 第111页 |
| ·结果 | 第111-113页 |
| ·重组PFAST-BAC 辅助表达载体的构建 | 第111-112页 |
| ·重组PCDNA3.1 质粒转染CHO 细胞 | 第112-113页 |
| ·ELISA 法检测血清抗体 | 第113页 |
| ·讨论 | 第113-114页 |
| ·小结 | 第114-116页 |
| 第六章 抗HPV16L1 IGY 抗体的制备 | 第116-122页 |
| ·实验材料 | 第116-117页 |
| ·质粒、菌株、细胞和实验动物 | 第116页 |
| ·主要试剂 | 第116-117页 |
| ·主要溶液、培养基、缓冲液 | 第117页 |
| ·主要仪器和设备 | 第117页 |
| ·实验方法 | 第117-119页 |
| ·母鸡免疫程序 | 第117页 |
| ·IGY 的分离及纯化 | 第117-118页 |
| ·ELISA 法测定IGY 抗体效价 | 第118页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第118页 |
| ·小鼠红细胞凝集抑制试验 | 第118-119页 |
| ·结果 | 第119-120页 |
| ·IGY 抗体效价的测定 | 第119页 |
| ·免疫组化染色 | 第119-120页 |
| ·小鼠红细胞凝凝集抑制试验 | 第120页 |
| ·讨论 | 第120-121页 |
| ·小结 | 第121-122页 |
| 第七章 HPV16 L1 抗原表位分析 | 第122-130页 |
| ·实验材料 | 第123-124页 |
| ·质粒、菌株 | 第123页 |
| ·主要试剂 | 第123页 |
| ·主要溶液、培养基、缓冲液 | 第123-124页 |
| ·主要仪器和设备 | 第124页 |
| ·实验方法 | 第124-126页 |
| ·噬菌体随机肽库的筛选 | 第124-125页 |
| ·噬菌体随机肽库的预筛选 | 第124页 |
| ·噬菌体随机肽库的筛选 | 第124页 |
| ·噬菌体的滴度测定 | 第124-125页 |
| ·噬菌体的扩增 | 第125页 |
| ·快速纯化噬菌体测序模板及测序 | 第125页 |
| ·噬菌体序列分析 | 第125页 |
| ·免疫斑点实验 | 第125-126页 |
| ·结果 | 第126-127页 |
| ·噬菌体随机肽库的筛选效率 | 第126页 |
| ·免疫斑点实验 | 第126页 |
| ·噬菌体单克隆测序与分析 | 第126-127页 |
| ·讨论 | 第127-129页 |
| ·小结 | 第129-130页 |
| 第八章 结论 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-157页 |
| 附录 | 第157-161页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第161-163页 |
