总状共头霉SPSR的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目录	第1-5页
摘要	第5-6页
Abstract	第6-7页
1 前言	第7-21页
·总状共头霉及其代谢产物杀虫活性的介绍	第8-9页
·天冬氨酸蛋白酶	第9-14页
·天冬氨酸蛋白酶的来源与分类	第10页
·天冬氨酸蛋白酶的结构与功能	第10-11页
·天冬氨酸蛋白酶的研究进展	第11-14页
·天冬氨酸蛋白酶的应用	第14页
·大肠杆菌表达系统	第14-17页
·大肠杆菌表达系统的宿主细胞	第14-15页
·大肠杆菌表达系统的载体	第15-16页
·影响外源蛋白表达的因素	第16-17页
·包涵体	第16-17页
·外源蛋白容易被宿主蛋白酶解	第17页
·发酵条件的影响	第17页
·pET载体系统	第17-20页
·pET载体系统的优越性	第18页
·本研究采用表达载体特征	第18-20页
·本论文的研究目的和研究内容	第20-21页
2 材料与方法	第21-36页
·实验材料	第21-24页
·菌株与质粒	第21页
·主要试剂	第21-22页
·工具酶	第21页
·试剂盒	第21页
·主要化学试剂	第21-22页
·Marker	第22页
·培养基和溶液	第22-24页
·培养基	第22-23页
·相关溶液	第23-24页
·主要仪器设备	第24页
·实验方法	第24-36页
·总状共头霉天冬氨酸类蛋白酶基因的克隆	第24-27页
·总状共头霉的总RNA提取	第24-25页
·RT-PCR扩增	第25-26页
·RT-PCR产物的纯化	第26-27页
·DNA片段的双酶切	第27页
·DNA片段的纯化	第27页
·克隆载体的构建及转化大肠杆菌	第27-30页
·pUC18质粒的双酶切	第27-28页
·pUC18质粒双酶切片段的纯化	第28页
·连接反应	第28页
·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备	第28页
·连接产物转化E.coli DH5α	第28-29页
·重组子的筛选	第29页
·重组子质粒的提取	第29页
·重组子质粒的酶切鉴定	第29-30页
·目的基因的测序	第30页
·表达载体的构建以及转化大肠杆菌	第30-36页
·目的片段的pfu扩增	第30-31页
·表达载体的选择	第31页
·表达载体与目的片段的双酶切	第31页
·载体与目的片段的纯化	第31页
·目的片段与四种载体的连接反应	第31-32页
·连接产物的转化	第32-33页
·转化子的诱导表达	第33-34页
·SDS-PAGE法鉴定转化子	第34-36页
3 结果与讨论	第36-51页
·总状共头霉天冬氨酸类蛋白酶基因的克隆	第36-38页
·总状共头霉的总RNA提取	第36页
·RT-PCR扩增目的基因	第36-38页
·克隆载体的构建及转化大肠杆菌	第38-41页
·pUC18载体	第38-39页
·克隆载体pUC18-SPSR的构建	第39页
·转化大肠杆菌	第39-40页
·重组子的筛选和鉴定	第40-41页
·目的基因的序列测定结果	第41页
·表达载体的构建以及转化大肠杆菌	第41-51页
·目的片段的Pfu扩增	第41-42页
·表达载体的选择	第42-46页
·表达载体pET-SPSR的构建	第46页
·目的片段与四种表达载体的连接	第46-47页
·连接产物转化大肠杆菌DH5α及PCR鉴定	第47页
·连接产物转化大肠杆菌DH5α及PCR鉴定	第47-48页
·大肠杆菌转化子表达蛋白的SDS-PAGE结果	第48-51页
4 全文总结与展望	第51-52页
·本论文的主要结论	第51页
·本论文的创新点	第51页
·展望	第51-52页
参考文献	第52-59页
致谢	第59-60页
研究生阶段发表论文情况	第60页
研究生阶段参与课题情况	第60-61页
附录Ⅰ	第61-64页