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水稻叶特异表达基因及苹果酸脱氢酶基因的克隆和功能分析

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-9页
综述第9-27页
一. 水稻叶特异表达基因的分离和鉴定第27-63页
 1.1 应用抑制消减杂交方法(SSH)克隆水稻叶特异表达基因片段第27-43页
  1.1.1 材料与方法第30-31页
   1.1.1.1 材料第30页
    1.1.1.1.1 水稻材料第30页
    1.1.1.1.2 细菌菌种和克隆载体第30页
    1.1.1.1.3 试剂盒和限制性内切酶第30页
   1.1.1.2 水稻叶特异表达基因的克隆第30-31页
    1.1.1.2.1 Trizol法分离总RNA第30-31页
    1.1.1.2.2 Poly(A)~+mRNA的分离纯化第31页
    1.1.1.2.3 抑制消减杂交及差式文库的筛选第31页
  1.1.2 结果第31-42页
   1.1.2.1 叶特异表达基因的克隆第31-32页
   1.1.2.2 差异基因片段的同源性分析第32-39页
    1.1.2.2.1 编码产物已知且全长cDNA已得到的片段第32-33页
    1.1.2.2.2 编码产物可推测但全长cDNA未得到的片段第33页
    1.1.2.2.3 编码产物和全长cDNA都未知的片段第33-39页
   1.1.2.3 差异基因片段的功能分析第39-42页
  1.1.3 讨论第42-43页
 1.2 水稻叶型PEPCcDNA的克隆与鉴定第43-55页
  1.2.1 材料与方法第45-47页
   1.2.1.1 材料第45页
   1.2.1.2 全长cDNA的推测与拼接第45页
   1.2.1.3 RNA的分离及全长cDNA引物的设计第45-46页
   1.2.1.4 cDNA及相应氨基酸序列的分析第46页
   1.2.1.5 定量PCR第46-47页
  1.2.2 结果与讨论第47-55页
   1.2.2.1 全长cDNA及推测氨基酸的序列分析第47-53页
   1.2.2.2 Ospepc的基因组结构分析第53-54页
   1.2.2.3 Ospepc的表达谱分析第54-55页
 1.3 水稻中性/碱性转化酶的分离与序列分析第55-61页
  1.3.1 材料与方法第56页
   1.3.1.1 材料第56页
   1.3.1.2 RNA的分离及引物的设计第56页
  1.3.2 结果与分析第56-61页
   1.3.2.1 Osinv全长cDNA的序列及其分析第56-60页
   1.3.2.2 Osinv的基因组结构分析第60页
   1.3.2.3 Osinv的表达谱分析第60-61页
 1.4 总结第61-63页
二. 水稻Lon蛋白酶基因的克隆及功能分析第63-91页
 2.1 材料与方法第64-70页
  2.1.1 材料第64页
  2.1.2 全长cDNA的推测与拼接第64-65页
  2.1.3 引物的设计及全长cDNA的克隆第65页
  2.1.4 cDNA序列及相应氨基酸序列的分析第65-66页
  2.1.5 电子杂交检测基因拷贝数第66页
  2.1.6 组织特异性表达情况的分析第66页
  2.1.7 水稻花粉的RNA原位杂交第66-70页
  2.1.8 目的基因在大肠杆菌中的表达第70页
 2.2 结果与讨论第70-91页
  2.2.1 Oslon基因的克隆及其推测氨基酸序列分析第70-75页
  2.2.2 Oslon可变剪切的发现与分析第75-76页
  2.2.3 Oslon基因的基因组结构研究及同源基因的克隆第76-87页
  2.2.4 Oslon的表达谱分析第87-88页
  2.2.5 RNA原位杂交分析不完全剪切的初步结果第88-90页
  2.2.6 Oslon在原核系统中的表达第90-91页
三. 水稻苹果酸脱氢酶基因的克隆与鉴定第91-104页
 3.1 材料与方法第92-94页
  3.1.1 材料第92页
  3.1.2 培养基第92页
  3.1.3 λ噬菌体的铺平板培养第92-93页
  3.1.4 探针的标记第93页
  3.1.5 阳性噬菌斑的筛选第93页
  3.1.6 噬菌体的体内切除以获得阳性克隆第93-94页
  3.1.7 水稻mMDH和cMDH基因在不同组织间的表达模式分析第94页
  3.1.8 水稻mMDH和cMDH基因在大肠杆菌中的表达及检测第94页
 3.2 结果与讨论第94-104页
  3.2.1 OsmMDH和OscMDH的获得及序列分析第94-97页
  3.2.2 OsmMDH和OscMDH组织表达模式的初步分析第97-100页
  3.2.3 OsmMDH和OscMDH在大肠杆菌中的表达及检测第100-104页
参考文献第104-116页
致谢第116-117页
PUBLICATIONS第117-118页

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