中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
综述 | 第9-27页 |
一. 水稻叶特异表达基因的分离和鉴定 | 第27-63页 |
1.1 应用抑制消减杂交方法(SSH)克隆水稻叶特异表达基因片段 | 第27-43页 |
1.1.1 材料与方法 | 第30-31页 |
1.1.1.1 材料 | 第30页 |
1.1.1.1.1 水稻材料 | 第30页 |
1.1.1.1.2 细菌菌种和克隆载体 | 第30页 |
1.1.1.1.3 试剂盒和限制性内切酶 | 第30页 |
1.1.1.2 水稻叶特异表达基因的克隆 | 第30-31页 |
1.1.1.2.1 Trizol法分离总RNA | 第30-31页 |
1.1.1.2.2 Poly(A)~+mRNA的分离纯化 | 第31页 |
1.1.1.2.3 抑制消减杂交及差式文库的筛选 | 第31页 |
1.1.2 结果 | 第31-42页 |
1.1.2.1 叶特异表达基因的克隆 | 第31-32页 |
1.1.2.2 差异基因片段的同源性分析 | 第32-39页 |
1.1.2.2.1 编码产物已知且全长cDNA已得到的片段 | 第32-33页 |
1.1.2.2.2 编码产物可推测但全长cDNA未得到的片段 | 第33页 |
1.1.2.2.3 编码产物和全长cDNA都未知的片段 | 第33-39页 |
1.1.2.3 差异基因片段的功能分析 | 第39-42页 |
1.1.3 讨论 | 第42-43页 |
1.2 水稻叶型PEPCcDNA的克隆与鉴定 | 第43-55页 |
1.2.1 材料与方法 | 第45-47页 |
1.2.1.1 材料 | 第45页 |
1.2.1.2 全长cDNA的推测与拼接 | 第45页 |
1.2.1.3 RNA的分离及全长cDNA引物的设计 | 第45-46页 |
1.2.1.4 cDNA及相应氨基酸序列的分析 | 第46页 |
1.2.1.5 定量PCR | 第46-47页 |
1.2.2 结果与讨论 | 第47-55页 |
1.2.2.1 全长cDNA及推测氨基酸的序列分析 | 第47-53页 |
1.2.2.2 Ospepc的基因组结构分析 | 第53-54页 |
1.2.2.3 Ospepc的表达谱分析 | 第54-55页 |
1.3 水稻中性/碱性转化酶的分离与序列分析 | 第55-61页 |
1.3.1 材料与方法 | 第56页 |
1.3.1.1 材料 | 第56页 |
1.3.1.2 RNA的分离及引物的设计 | 第56页 |
1.3.2 结果与分析 | 第56-61页 |
1.3.2.1 Osinv全长cDNA的序列及其分析 | 第56-60页 |
1.3.2.2 Osinv的基因组结构分析 | 第60页 |
1.3.2.3 Osinv的表达谱分析 | 第60-61页 |
1.4 总结 | 第61-63页 |
二. 水稻Lon蛋白酶基因的克隆及功能分析 | 第63-91页 |
2.1 材料与方法 | 第64-70页 |
2.1.1 材料 | 第64页 |
2.1.2 全长cDNA的推测与拼接 | 第64-65页 |
2.1.3 引物的设计及全长cDNA的克隆 | 第65页 |
2.1.4 cDNA序列及相应氨基酸序列的分析 | 第65-66页 |
2.1.5 电子杂交检测基因拷贝数 | 第66页 |
2.1.6 组织特异性表达情况的分析 | 第66页 |
2.1.7 水稻花粉的RNA原位杂交 | 第66-70页 |
2.1.8 目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第70页 |
2.2 结果与讨论 | 第70-91页 |
2.2.1 Oslon基因的克隆及其推测氨基酸序列分析 | 第70-75页 |
2.2.2 Oslon可变剪切的发现与分析 | 第75-76页 |
2.2.3 Oslon基因的基因组结构研究及同源基因的克隆 | 第76-87页 |
2.2.4 Oslon的表达谱分析 | 第87-88页 |
2.2.5 RNA原位杂交分析不完全剪切的初步结果 | 第88-90页 |
2.2.6 Oslon在原核系统中的表达 | 第90-91页 |
三. 水稻苹果酸脱氢酶基因的克隆与鉴定 | 第91-104页 |
3.1 材料与方法 | 第92-94页 |
3.1.1 材料 | 第92页 |
3.1.2 培养基 | 第92页 |
3.1.3 λ噬菌体的铺平板培养 | 第92-93页 |
3.1.4 探针的标记 | 第93页 |
3.1.5 阳性噬菌斑的筛选 | 第93页 |
3.1.6 噬菌体的体内切除以获得阳性克隆 | 第93-94页 |
3.1.7 水稻mMDH和cMDH基因在不同组织间的表达模式分析 | 第94页 |
3.1.8 水稻mMDH和cMDH基因在大肠杆菌中的表达及检测 | 第94页 |
3.2 结果与讨论 | 第94-104页 |
3.2.1 OsmMDH和OscMDH的获得及序列分析 | 第94-97页 |
3.2.2 OsmMDH和OscMDH组织表达模式的初步分析 | 第97-100页 |
3.2.3 OsmMDH和OscMDH在大肠杆菌中的表达及检测 | 第100-104页 |
参考文献 | 第104-116页 |
致谢 | 第116-117页 |
PUBLICATIONS | 第117-118页 |