| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-30页 |
| ·融合蛋白的切割及工具酶 | 第11-13页 |
| ·融合蛋白的应用 | 第11-12页 |
| ·融合蛋白的切割 | 第12-13页 |
| ·融合蛋白切割常用的工具酶 | 第13页 |
| ·肠激酶简介 | 第13-19页 |
| ·肠激酶的研究历史 | 第14-15页 |
| ·肠激酶的结构特点 | 第15页 |
| ·肠激酶的酶学特点及理化特征 | 第15-16页 |
| ·肠激酶的基因工程研究进展 | 第16-18页 |
| ·肠激酶的酶活测定 | 第18-19页 |
| ·包涵体的研究进展 | 第19-24页 |
| ·包涵体的形成机制 | 第19页 |
| ·蛋白质的体内折叠机制 | 第19-20页 |
| ·包涵体的体外折叠机制 | 第20-21页 |
| ·包涵体蛋白复性策略 | 第21-24页 |
| ·亲和层析 | 第24-27页 |
| ·亲和层析技术的产生与发展 | 第24-25页 |
| ·亲和吸附介质 | 第25-26页 |
| ·亲和纯化的操作方式 | 第26页 |
| ·固定化金属离子亲和层析 | 第26-27页 |
| ·相容质粒的共表达 | 第27-29页 |
| ·共表达的应用 | 第27-28页 |
| ·共表达的策略 | 第28-29页 |
| ·本文的主要研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 肠激酶蛋白包涵体的复性与纯化 | 第30-49页 |
| ·试验材料 | 第30-31页 |
| ·菌种 | 第30页 |
| ·试验试剂 | 第30-31页 |
| ·主要试验仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·肠激酶蛋白的初步表达 | 第31-32页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达结果 | 第32-34页 |
| ·上清液中肠激酶亲和层析分离 | 第34-35页 |
| ·包涵体中目的蛋白的复性与纯化 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白的定量估算 | 第36-37页 |
| ·纯化后目标蛋白收率的计算 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-49页 |
| ·工程菌生长曲线测定 | 第38页 |
| ·诱导表达产物的SDS-PAGE 鉴定 | 第38-39页 |
| ·上清液中肠激酶亲和层析分离 | 第39-40页 |
| ·包涵体中目的蛋白的复性与纯化 | 第40-46页 |
| ·目标蛋白纯化后产量及收率 | 第46-49页 |
| 第三章 重组质粒pSB3K3-EK_L构建 | 第49-65页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·菌种和载体 | 第50页 |
| ·实验试剂 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-57页 |
| ·菌种活化及质粒提取 | 第51页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·重组质粒pSB3K3-EK_L构建策略 | 第51-55页 |
| ·肠激酶包涵体蛋白的表达变性复性 | 第55-56页 |
| ·肠激酶的活性测定 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-65页 |
| ·EK_LPCR 扩增产物及酶切的电泳鉴定 | 第57页 |
| ·pSB3K3-8p 酶切鉴定及与PCR 产物双酶切切胶回收电泳鉴定 | 第57-59页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第59页 |
| ·重组子的基因测序 | 第59-62页 |
| ·不同条件对肠激酶蛋白活性的影响 | 第62-65页 |
| 第四章 结论与展望 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| ·展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72页 |