黑曲霉脂肪酶盖子结构域突变对其活性影响的研究
| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 绪论 | 第10-24页 |
| 1. 微生物脂肪酶的研究进展 | 第10-19页 |
| ·简介 | 第10-11页 |
| ·微生物脂肪酶分子的结构特征 | 第11-13页 |
| ·微生物脂肪酶的应用 | 第13-15页 |
| ·微生物脂肪酶资源的开发 | 第15-17页 |
| ·微生物脂肪酶的催化机制 | 第17-19页 |
| 2. 微生物脂肪酶分子进化 | 第19-20页 |
| ·理性设计 | 第19-20页 |
| ·定向进化 | 第20页 |
| 3. 本课题研究背景、意义及技术路线 | 第20-24页 |
| ·课题背景 | 第20-22页 |
| ·研究意义 | 第22页 |
| ·技术路线 | 第22-24页 |
| 第一章 黑曲霉脂肪酶基因的定点突变 | 第24-42页 |
| 1. 材料与方法 | 第24-34页 |
| ·菌种与质粒 | 第24-25页 |
| ·工具酶 | 第25页 |
| ·试剂与溶液 | 第25页 |
| ·常用培养基与缓冲液 | 第25页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第25-26页 |
| ·黑曲霉脂肪酶基因的制备 | 第26-27页 |
| ·突变基因的获得 | 第27-29页 |
| ·重组质粒的构建 | 第29-32页 |
| ·重组质粒的转化及筛选 | 第32-33页 |
| ·脂肪酶突变基因的DNA测序 | 第33-34页 |
| 2. 结果与分析 | 第34-40页 |
| ·突变基因的获得 | 第34-36页 |
| ·重组质粒的构建 | 第36页 |
| ·大肠杆菌重组转化子的验证筛选 | 第36-37页 |
| ·脂肪酶突变基因序列分析 | 第37-40页 |
| 3. 本章讨论 | 第40-42页 |
| 第二章 黑曲霉脂肪酶基因的片段置换 | 第42-58页 |
| 1. 材料与方法 | 第42-49页 |
| ·菌种与质粒 | 第42页 |
| ·工具酶 | 第42页 |
| ·试剂与溶液 | 第42页 |
| ·常用培养基与缓冲液 | 第42-43页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第43页 |
| ·黑曲霉脂肪酶基因的制备 | 第43页 |
| ·突变基因的获得 | 第43-46页 |
| ·重组质粒的构建 | 第46-48页 |
| ·重组质粒的转化及筛选 | 第48-49页 |
| ·脂肪酶突变基因的DNA测序 | 第49页 |
| 2. 结果与分析 | 第49-55页 |
| ·突变基因的获得 | 第49-51页 |
| ·重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌重组转化子的验证筛选 | 第52-53页 |
| ·脂肪酶突变基因的序列分析 | 第53-55页 |
| 3. 本章讨论 | 第55-58页 |
| 第三章 脂肪酶突变基因的表达与纯化 | 第58-76页 |
| 1. 材料与方法 | 第58-66页 |
| ·菌种与质粒 | 第58页 |
| ·工具酶 | 第58页 |
| ·试剂与溶液 | 第58页 |
| ·常用培养基与缓冲液 | 第58-60页 |
| ·重组表达质粒的大量制备 | 第60-61页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第61-62页 |
| ·重组表达载体转化毕赤酵母GS115 | 第62页 |
| ·毕赤酵母转化子的筛选 | 第62-64页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中诱导表达 | 第64页 |
| ·突变脂肪酶的纯化 | 第64-65页 |
| ·脂肪酶活性检测 | 第65-66页 |
| 2. 结果与分析 | 第66-73页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第66-67页 |
| ·重组表达质粒的电转及筛选 | 第67-69页 |
| ·突变脂肪酶基因的诱导表达及分析 | 第69-72页 |
| ·突变脂肪酶纯化产物分析 | 第72-73页 |
| 3. 本章讨论 | 第73-76页 |
| 第四章 结论 | 第76-78页 |
| 附录1 本课题技术流程图 | 第78-80页 |
| 附录2 英文缩略词表 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 个人简历 | 第92-94页 |
