| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 缩略词(ABBREVIATION) | 第18-20页 |
| 第1章 文献综述 | 第20-37页 |
| 前言 | 第20-21页 |
| 1 四环素类药物的研究进展 | 第21-28页 |
| ·TCs药物结构与理化性质 | 第22-24页 |
| ·TCs药物动学及残留 | 第24-25页 |
| ·TCs药物残留管理 | 第25-26页 |
| ·TCs药物残留分析研究进展 | 第26-28页 |
| 2 多西环素药物的研究进展 | 第28-34页 |
| ·DOX应用概况 | 第28-29页 |
| ·DOX药动学特点 | 第29-30页 |
| ·DOX残留检测方法 | 第30-34页 |
| ·高效液相色谱法 | 第30-31页 |
| ·液相色谱—质谱联用法 | 第31-32页 |
| ·薄层色谱法 | 第32页 |
| ·液相色谱电泳联用方法 | 第32页 |
| ·微生物方法 | 第32-33页 |
| ·放射免疫分析方法 | 第33页 |
| ·毛细管电泳法 | 第33页 |
| ·酶联免疫吸附试验法 | 第33-34页 |
| 3 胶体金免疫层析方法原理及应用 | 第34-35页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第35-37页 |
| 第2章 多西环素人工抗原的合成与鉴定 | 第37-56页 |
| 1 研究目的与意义 | 第37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-45页 |
| ·材料 | 第37-40页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·溶液 | 第38-39页 |
| ·ELISA溶液 | 第38-39页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳溶液 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-45页 |
| ·人工抗原的合成 | 第40-42页 |
| ·DOX-PABA-BSA(OVA)合成方法 | 第40-41页 |
| ·DOX-BSA(OVA)合成方法 | 第41-42页 |
| ·人工抗原的鉴定 | 第42-45页 |
| ·紫外分光光度法(UV)鉴定 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳法鉴定 | 第42-43页 |
| ·红外分光光度仪法(IR)鉴定 | 第43页 |
| ·小鼠多抗血清(DOX-pAb)鉴定 | 第43-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-52页 |
| ·DOX结构表征 | 第45页 |
| ·紫外鉴定 | 第45-47页 |
| ·DOX-PABA-BSA偶联物的紫外鉴定 | 第45-46页 |
| ·DOX-BSA偶联物的紫外鉴定 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 | 第47-48页 |
| ·红外光谱鉴定 | 第48页 |
| ·动物免疫试验鉴定 | 第48-52页 |
| ·间接ELISA效价测定 | 第48-49页 |
| ·DOX pAb敏感性鉴定 | 第49-51页 |
| ·DOX pAb特异性鉴定 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| ·关于DOX人工半抗原的设计和制备方法 | 第52-53页 |
| ·关于与DOX偶联载体蛋白的选择 | 第53-54页 |
| ·关于DOX人工抗原的鉴定方法 | 第54页 |
| 5 小结 | 第54-56页 |
| 第3章 多西环素多抗和单抗的制备及其免疫学特性鉴定 | 第56-71页 |
| 1 研究目的与意义 | 第56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-62页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·血清、试验动物 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56-57页 |
| ·主要溶液配置 | 第57页 |
| ·仪器设备 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-62页 |
| ·Anti-DOX pAb的制备、纯化、测定 | 第57-58页 |
| ·Anti-DOX pAb的制备 | 第57-58页 |
| ·Anti-DOX pAb的纯化 | 第58页 |
| ·Anti-DOX pAb的效价、敏感性测定 | 第58页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第58-61页 |
| ·细胞融合备用小鼠的选择 | 第58页 |
| ·骨髓瘤细胞的复苏与冻存 | 第58-59页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第59页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的活化及制备 | 第59-60页 |
| ·脾细胞的制备 | 第60页 |
| ·细胞融合 | 第60页 |
| ·融合细胞的培养及记录 | 第60-61页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第61页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第61页 |
| ·杂交瘤细胞染色体计数 | 第61页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第61页 |
| ·单克隆抗体的生产 | 第61页 |
| ·抗体效价测定 | 第61页 |
| ·单克隆抗体的免疫学特性鉴定 | 第61-62页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第61-62页 |
| ·敏感性鉴定 | 第62页 |
| ·特异性鉴定 | 第62页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-68页 |
| ·Anti-DOX pAb的效价、敏感性测定 | 第62-63页 |
| ·Anti-DOX mAb杂交瘤细胞株的建立 | 第63-65页 |
| ·细胞融合备用小鼠的选择 | 第63-64页 |
| ·杂交瘤细胞株的筛选 | 第64-65页 |
| ·杂交瘤细胞染色体计数 | 第65页 |
| ·杂交瘤细胞株单克隆抗体效价 | 第65-66页 |
| ·单克隆抗体的免疫学特性鉴定 | 第66-68页 |
| ·敏感性鉴定 | 第66-67页 |
| ·特异性鉴定 | 第67页 |
| ·单克隆抗体亚型 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| ·免疫程序对抗体产生的影响 | 第68-69页 |
| ·关于杂交瘤细胞株的筛选方法 | 第69页 |
| ·关于杂交瘤细胞株的克隆化 | 第69-70页 |
| 5 小结 | 第70-71页 |
| 第4章 多西环素残留ELISA方法的建立及性能测定 | 第71-88页 |
| 1 研究目的与意义 | 第71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-75页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·试剂 | 第71页 |
| ·溶液 | 第71页 |
| ·仪器 | 第71页 |
| ·兔抗DOX多抗 | 第71-72页 |
| ·方法 | 第72-75页 |
| ·ELISA检测方法建立 | 第72-73页 |
| ·抗体工作浓度和包被抗原浓度的初步确定 | 第72页 |
| ·包被原和抗体最佳工作浓度的确定 | 第72页 |
| ·包被原最佳包被时间和最适竞争时间的选择 | 第72页 |
| ·标准曲线的建立 | 第72-73页 |
| ·最低检测限的确定 | 第73页 |
| ·间接竞争ELISA标准曲线的精密度测试 | 第73页 |
| ·交叉反应试验 | 第73页 |
| ·间接竞争ELISA方法对组织样品的检测及考核 | 第73-75页 |
| ·ELISA测试组织样品的处理方法 | 第73页 |
| ·基质效应实验 | 第73-74页 |
| ·组织最低检测限的确定 | 第74页 |
| ·添加回收率实验 | 第74页 |
| ·Cut-off值测定 | 第74页 |
| ·ELISA对于DOX添加标准品的检测效果及其与HPLC的比较 | 第74-75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-85页 |
| ·ELISA检测方法 | 第75-80页 |
| ·包被原浓度和抗体工作浓度的初步确定 | 第75-76页 |
| ·最佳抗原包被浓度和抗体浓度 | 第76-77页 |
| ·最佳包被时间和竞争时间 | 第77页 |
| ·间接竞争ELISA标准曲线的建立 | 第77-78页 |
| ·间接竞争ELISA标准曲线的精密度 | 第78-79页 |
| ·交叉反应检测特异性试验 | 第79-80页 |
| ·间接竞争ELISA方法对组织样品的检测及考核 | 第80-85页 |
| ·组织样品基质效应试验 | 第80-82页 |
| ·ELISA方法在组织中最低检测限 | 第82页 |
| ·组织添加回收率 | 第82-83页 |
| ·临界值Cut-off值 | 第83-84页 |
| ·ELSIA方法与HPLC方法准确度和精密度 | 第84-85页 |
| 4 讨论 | 第85-87页 |
| ·关于ELISA检测方法及影响因素 | 第85-86页 |
| ·ELISA方法的先进性和可靠性 | 第86页 |
| ·组织基质干扰的控制 | 第86-87页 |
| 5 小结 | 第87-88页 |
| 第5章 多西环素残留快速检测金标试纸的研制及性能测定 | 第88-105页 |
| 1 研究目的与意义 | 第88页 |
| 2 材料与方法 | 第88-94页 |
| ·材料 | 第88-90页 |
| ·化学试剂 | 第88-89页 |
| ·溶液的配制 | 第89页 |
| ·仪器 | 第89-90页 |
| ·方法 | 第90-94页 |
| ·胶体金的制备 | 第90页 |
| ·胶体金的质量鉴定 | 第90页 |
| ·紫外可见光分光光度计扫描 | 第90页 |
| ·透射电镜扫描 | 第90页 |
| ·胶体金标记条件 | 第90-92页 |
| ·最适标记胶体金pH值 | 第90-91页 |
| ·最适标记量的确定 | 第91页 |
| ·金标Anti-DOX mAb复合物的制备与纯化 | 第91-92页 |
| ·DOX残留快速检测免疫金标试纸条的建立 | 第92-93页 |
| ·试纸条的构建 | 第92-93页 |
| ·各种生物材料最佳浓度的选择 | 第93页 |
| ·金标垫的制备 | 第93页 |
| ·NC膜的制备 | 第93页 |
| ·检测试纸条的组装 | 第93页 |
| ·待检组织样品预处理 | 第93页 |
| ·DOX残留检测试纸条的灵敏度测定 | 第93-94页 |
| ·DOX残留检测试纸条的特异性测定 | 第94页 |
| ·DOX残留检测试纸条的重复性测定 | 第94页 |
| ·DOX残留检测试纸条的稳定性试验 | 第94页 |
| 3 结果与分析 | 第94-101页 |
| ·胶体金的制备 | 第94-95页 |
| ·Anti-DOX mAb胶体金的标记条件 | 第95-97页 |
| ·最适标记胶体金pH值 | 第95-96页 |
| ·最适标记量 | 第96-97页 |
| ·DOX残留检测试纸条的灵敏度试验 | 第97-99页 |
| ·DOX残留检测试纸条的特异性测定 | 第99页 |
| ·DOX残留检测试纸条的重复性测定 | 第99-100页 |
| ·DOX残留检测试纸条的稳定性试验 | 第100-101页 |
| 4 讨论 | 第101-104页 |
| ·胶体金制备方法及胶体金粒度的选择 | 第101页 |
| ·待标记用蛋白的准备 | 第101-102页 |
| ·胶体金的标记条件 | 第102-103页 |
| ·最佳标记pH值确定 | 第102页 |
| ·最适蛋白标记量确定 | 第102-103页 |
| ·试纸条的性能与结果判断方法 | 第103-104页 |
| 5 小结 | 第104-105页 |
| 第6章 ELISA和金标试纸检测方法与HPLC确证的比较 | 第105-113页 |
| 1 研究目的与意义 | 第105页 |
| 2 材料与方法 | 第105-106页 |
| ·材料 | 第105-106页 |
| ·试剂与耗材 | 第105页 |
| ·主要仪器 | 第105-106页 |
| ·方法 | 第106页 |
| ·动物饲喂试验 | 第106页 |
| ·ELISA方法和试纸条对实际组织样品的检测结果与HPLC的比较 | 第106页 |
| ·ELISA方法和试纸条的临床应用 | 第106页 |
| 3 结果与分析 | 第106-111页 |
| ·3种检测方法的线性方程、回归系数、线性范围和检测限的比较 | 第106-108页 |
| ·ELISA方法、Test-strip与HPLC方法对于实际样品的检测效果 | 第108-109页 |
| ·ELISA方法与HPLC方法检测效果的相关性 | 第109页 |
| ·ELISA方法和Test-strip临床样品的检测 | 第109-111页 |
| 4 讨论 | 第111页 |
| ·ELISA、GICA和HPLC检测方法的比较 | 第111页 |
| ·DOX残留不同检测方法灵敏度的比较 | 第111页 |
| 5 小结 | 第111-113页 |
| 研究结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-128页 |
| 附录Ⅰ:研究生期间发表的主要论文、专利和著作 | 第128-129页 |
| 附录Ⅱ:论文原始数据表格 | 第129-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
