| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 主要符号对照表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.1 单分子荧光能量共振转移技术概述 | 第12-19页 |
| 1.1.1 单分子荧光共振能量转移技术概述 | 第12-15页 |
| 1.1.2 全内反射荧光技术和光镊技术 | 第15-17页 |
| 1.1.3 设备构建及技术进展 | 第17-19页 |
| 1.2 RPA研究进展 | 第19-24页 |
| 1.2.1 RPA简介 | 第19页 |
| 1.2.2 RPA的结构 | 第19-21页 |
| 1.2.3 RPA与大分子的相互作用 | 第21-22页 |
| 1.2.4 RPA的功能 | 第22-24页 |
| 1.3 Rad51研究进展 | 第24-26页 |
| 第二章 RPA的表达与纯化 | 第26-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 质粒、表达菌株、柱材 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂配制 | 第26-28页 |
| 2.1.3 实验所需仪器 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.2.1 RPA蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| 2.2.2 RPA的Affigel Blue柱纯化过程 | 第28-29页 |
| 2.2.3 RPA的羟基磷灰石柱纯化 | 第29页 |
| 2.2.4 RPA的MonoQ柱纯化 | 第29页 |
| 2.2.5 RPA的S200分子筛纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 RPA的浓缩与冻存 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-32页 |
| 2.3.1 Affigel Blue柱和羟基磷灰石柱纯化结果 | 第30页 |
| 2.3.2 MonoQ柱和分子筛纯化结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 蛋白冻存 | 第31-32页 |
| 2.4 总结与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 Rad51的表达与纯化 | 第33-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 质粒、表达菌株、柱材 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂配制 | 第33-34页 |
| 3.1.3 实验所需仪器 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-35页 |
| 3.2.1 Rad51蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| 3.2.2 Rad51的镍柱纯化过程 | 第34-35页 |
| 3.2.3 Rad51的MonoQ柱纯化过程 | 第35页 |
| 3.2.4 Rad51的浓缩与冻存 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-36页 |
| 第四章 RPA的结合性质 | 第36-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第36页 |
| 4.1.2 实验器材 | 第36页 |
| 4.1.3 配制实验缓冲液 | 第36页 |
| 4.1.4 实验材料准备 | 第36-37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-44页 |
| 4.2.1 单分子反应槽制备 | 第37-39页 |
| 4.2.2 单分子及分子筛反应DNA准备 | 第39-41页 |
| 4.2.3 单分子实验步骤 | 第41-42页 |
| 4.2.4 分子筛实验步骤 | 第42-44页 |
| 4.2.5 RPA的结合反应条件优化 | 第44页 |
| 4.3 实验结果 | 第44-64页 |
| 4.3.1 RPA的结合性质测定结果 | 第44-46页 |
| 4.3.2 单分子实验结果 | 第46-64页 |
| 第五章 总结 | 第64-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |