| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-16页 |
| CHAPTER1 REVIEW:RESEARCH PROGRESS ON TICK MICRO RNA | 第16-39页 |
| Introduction | 第16-17页 |
| 1.1 Overview of tick species in China | 第17-22页 |
| 1.1.1 Genus Ixodes | 第17-18页 |
| 1.1.2 Genus Amblyomma | 第18页 |
| 1.1.3 Genus Hyalomma | 第18页 |
| 1.1.4 Genus Dermacentor | 第18-19页 |
| 1.1.5 Genus Rhipicephalus | 第19页 |
| 1.1.6 Genus Haemaphysalis | 第19-22页 |
| 1.2 Tick saliva | 第22-28页 |
| 1.2.1 Impact of Tick Saliva on Host Haemostasis | 第25-27页 |
| 1.2.2 Tick saliva and pathogen transmission | 第27-28页 |
| 1.3 MicroRNA | 第28-38页 |
| 1.3.1 mi RNA in arthropods | 第30-32页 |
| 1.3.2 mi RNA in Tick species | 第32-33页 |
| 1.3.3 Ixode scapularis | 第33页 |
| 1.3.4 Ixodes ricinus | 第33页 |
| 1.3.5 Rhipicephalus haemaphysaloides | 第33-34页 |
| 1.3.6 Rhiphicephalus microplus | 第34页 |
| 1.3.7 Rhipicephalus sanguineus | 第34页 |
| 1.3.8 Hyalomma anatolicum | 第34页 |
| 1.3.9 Haemaphysalis longicornis | 第34-35页 |
| 1.3.10 MicroRNAs as biomarkers for the diagnosis of parasitic diseases | 第35-36页 |
| 1.3.11 microRNAs in the regulation of the host–parasite interactions | 第36-37页 |
| 1.3.12 MicroRNAs as targets for parasite control | 第37-38页 |
| 1.4 Study objectives | 第38-39页 |
| CHAPTER2 A MICRORNA PROFILE OF SALIVA IN HAEMAPHYSALIS LONGICORNIS(IXODIDA:IXODIDAE) | 第39-50页 |
| 2.2 Introduction | 第39-40页 |
| 2.3 Methods | 第40-43页 |
| 2.3.1 Tick rearing and feeding | 第40-41页 |
| 2.3.2 Saliva collection | 第41-42页 |
| 2.3.3 Total RNA isolation | 第42-43页 |
| 2.4 Bioinformatics Pipeline | 第43-45页 |
| 2.4.1 Data Filtering | 第43-44页 |
| 2.4.2 sRNA Classification | 第44页 |
| 2.4.3 sRNA Prediction | 第44页 |
| 2.4.4 sRNA Expression | 第44-45页 |
| 2.4.5 Target Prediction | 第45页 |
| 2.5 Chemical Reagents preparation | 第45页 |
| 2.6 Results | 第45-48页 |
| 2.6.1 sRNA library from tick saliva | 第45-48页 |
| 2.7 Discussion | 第48-49页 |
| 2.8 Conclusions | 第49-50页 |
| CHAPTER3 ROLE OF MIR-375 IN HAEMAPHYSALIS LONGICORNIS(IXODIDA:IXODIDAE) | 第50-63页 |
| 3.2 Introduction | 第50-51页 |
| 3.3 Methods | 第51-52页 |
| 3.3.1 Sample collection at different developmental stages and tissue dissection | 第51页 |
| 3.3.2 Total RNA isolation | 第51页 |
| 3.3.3 Homogenization | 第51页 |
| 3.3.4 Phase separation | 第51-52页 |
| 3.3.5 RNA precipitation | 第52页 |
| 3.3.6 RNA Washing | 第52页 |
| 3.3.7 Solubilize the RNA | 第52页 |
| 3.3.8 Determine the RNA yield | 第52页 |
| 3.4 cDNA synthesis | 第52-53页 |
| 3.4.1 Thawing | 第52页 |
| 3.4.2 Preparing master mix | 第52-53页 |
| 3.4.3 cDNA dilution | 第53页 |
| 3.5 Real-time PCR | 第53-54页 |
| 3.5.1 Reaction setup for real-time PCR | 第53-54页 |
| 3.6 Feeding periods and oviposition | 第54页 |
| 3.7 Antagomir synthesis and application | 第54页 |
| 3.8 Cloning of Pre-miRNA | 第54-55页 |
| 3.9 Gel Electrophoresis | 第55-57页 |
| 3.9.1 Gel Preparation | 第55页 |
| 3.9.2 PCR products loading | 第55-56页 |
| 3.9.3 Purification of bands | 第56页 |
| 3.9.4 Ligation into Vector | 第56页 |
| 3.9.5 Transformation | 第56-57页 |
| 3.10 Statistical analysis | 第57页 |
| 3.11 Chemical Reagents preparation | 第57-58页 |
| 3.11.1 10X PBS | 第57页 |
| 3.11.2 50X TAE buffer | 第57页 |
| 3.11.3 1X TAE buffer | 第57-58页 |
| 3.11.4 LB Broth base | 第58页 |
| 3.11.5 LB agar | 第58页 |
| 3.12 Results | 第58-62页 |
| 3.12.1 Pre-miR-375 amplification | 第58-59页 |
| 3.12.2 Expression profile of miR-375 in various developmental stages and tissue | 第59页 |
| 3.12.3 Silencing of miRNA-375 affects egg production and hatchability | 第59-62页 |
| 3.13 Discussion | 第62页 |
| 3.14 Conclusions | 第62-63页 |
| CHAPTER4 LOCALIZED EXPRESSION AND INHIBITION EFFECT OF MIR-184 ON BLOOD DIGESTION AND OVIPOSITION IN HAEMAPHYSALIS LONGICORNIS(IXODIDA:IXODIDAE) | 第63-80页 |
| 4.2 Introduction | 第64-65页 |
| 4.3 Methods | 第65-66页 |
| 4.3.1 Tick rearing and feeding | 第65页 |
| 4.3.2 Sample collection at different growth phases and tissue dissection | 第65页 |
| 4.3.3 Total RNA isolation | 第65页 |
| 4.3.4 Real-Time PCR for miR-184 | 第65-66页 |
| 4.4 Feeding periods and oviposition | 第66页 |
| 4.5 Antagomir synthesis and application | 第66页 |
| 4.6 Computational prediction of miRNA targets | 第66-68页 |
| 4.6.1 Real-Time PCR of predicted targets | 第67页 |
| 4.6.2 Genomic DNA elimination reaction | 第67页 |
| 4.6.3 Reverse-transcription reaction | 第67-68页 |
| 4.7 SDS-PAGE | 第68-69页 |
| 4.7.1 SDS-PAGE reagents | 第68页 |
| 4.7.2 1 mol/L Tris-Cl | 第68-69页 |
| 4.7.3 10% SDS | 第69页 |
| 4.7.4 10X SDS-PAGE running buffer | 第69页 |
| 4.7.5 1X SDS-PAGE buffer | 第69页 |
| 4.7.6 2X SDS-PAGE loading buffer | 第69页 |
| 4.8 Results | 第69-77页 |
| 4.8.1 Expression profile of miR-184 in various developmental stages and tissues | 第69-70页 |
| 4.8.2 Silencing of miRNA-184 affects oviposition | 第70-73页 |
| 4.8.3 Expression analysis of Vitellogenin after inhibition of miR-184 | 第73-75页 |
| 4.8.4 PCR amplification of Vg-1 | 第75-76页 |
| 4.8.5 Expression analysis of K-10 protein after inhibition of miR-184 | 第76-77页 |
| 4.8.6 SDS-PAGE gel after silencing miR-184 | 第77页 |
| 4.9 Discussion | 第77-79页 |
| 4.10 Conclusion | 第79-80页 |
| CHAPTER5 CONCLUSION | 第80-81页 |
| REFERENCES | 第81-99页 |
| ACKNOWLEDGEMENT | 第99-100页 |
| CURRICULUM VITAE | 第100页 |
